tag:blogger.com,1999:blog-49568541129637098852024-02-19T02:07:29.236-08:00HPLC BrasilUm blog brasileiro para discussão da técnica de Cromatografia Líquida de Alta Performance,com a tradução de artigos internacionais e troca de conhecimentos entre os participantes.
Seja bem-vindo !!!Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.comBlogger26125tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-84548159762542637122023-03-03T11:00:00.003-08:002023-03-03T11:00:43.106-08:00<p> <span style="color: white;"> </span><span style="color: white;"> </span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"> </span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white; mso-themecolor: background1;">Artigos</span></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjoyRPtXyu4LRxAkPIL7cbHnu4PC5qZyLfyDe31evZT_6NbtL9D78UmZ0uo_Ni7O9elWEg3SlvG6FagAemzc5aCiZnZmcVb6NDQK87FMlXTqayiC6BFIR9x5q2aWHstIpq_X6lt5jRhSqgSaozAo3vxN7Kn5oCVcC4a5bT9OcQW3Znc0sAwAOCMMV3Fmw/s417/logos_Welch_Chroma.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="132" data-original-width="417" height="101" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjoyRPtXyu4LRxAkPIL7cbHnu4PC5qZyLfyDe31evZT_6NbtL9D78UmZ0uo_Ni7O9elWEg3SlvG6FagAemzc5aCiZnZmcVb6NDQK87FMlXTqayiC6BFIR9x5q2aWHstIpq_X6lt5jRhSqgSaozAo3vxN7Kn5oCVcC4a5bT9OcQW3Znc0sAwAOCMMV3Fmw/s320/logos_Welch_Chroma.png" width="320" /></a></div><br />
Welch / Chromastore Traduzido por
Ronaldo Buissa Netto<o:p></o:p><p></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"> </span></b></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="color: white; font-size: 20.0pt; line-height: 107%; mso-themecolor: background1;">Vantagens e FAQ`s da cromatografia de
interação hidrofílica (HILIC)<o:p></o:p></span></b></p>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgodp5o02fsVzO9Xup90BldtOE34iWR-ZumhOwqc-iNGOhI4NArt5c7tihnQ9QVtR-eb2hSieKnBc-MFIzd5GQNilYv46YTLQSyaCAjORCA-958gRNHuGcvdPcEXI3XWHI9ZdflEBrpW5u8h68AUIMe2Yh-q8FDaC4nRoh6XZ4BSuh5jztFYHy8Jh8pzA/s1878/HPLC%202.JPG" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="1252" data-original-width="1878" height="213" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgodp5o02fsVzO9Xup90BldtOE34iWR-ZumhOwqc-iNGOhI4NArt5c7tihnQ9QVtR-eb2hSieKnBc-MFIzd5GQNilYv46YTLQSyaCAjORCA-958gRNHuGcvdPcEXI3XWHI9ZdflEBrpW5u8h68AUIMe2Yh-q8FDaC4nRoh6XZ4BSuh5jztFYHy8Jh8pzA/s320/HPLC%202.JPG" width="320" /></a></div><br /><p class="MsoNormal"><span style="color: white;">A cromatografia de interação hidrofílica (HILIC) pode ser
considerada como cromatografia de fase normal usando uma fase móvel
aquosa-orgânica, por isso às vezes é chamada de “cromatografia de fase normal
aquosa”. A coluna HILIC é mais polar do que a coluna de fase reversa, e a água,
solvente altamente polar, é usada como solvente forte. Aumentar a proporção de
água reduz a retenção da amostra (ao contrário da cromatografia de fase
reversa). Solutos mais polares e ionizados são mais retidos no HILIC. Na maioria
das separações HILIC, a proporção de água na fase móvel está entre 3% e 40%.
Quando a proporção de água é superior a 40%, a retenção é geralmente fraca.</span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="color: white;">Fase Estacionária<o:p></o:p></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">As fases estacionárias usadas rotineiramente na
cromatografia HILIC incluem: coluna de sílica pura, coluna amino, coluna amida,
coluna zwitterion, etc. As colunas de sílica pura têm a vantagem de “sangrar”
menos e são mais populares ao usar detectores CAD, ELSD e LC-MS . As colunas de
aminoácidos, usadas na cromatografia HILIC, são particularmente adequadas para
a separação de carboidratos (sacarídeos). A coluna zwitteriônica não precisa
mais usar reagentes de pareamento iônico (PICs), tem forte hidrofilicidade e
pode efetivamente reter moléculas básicas / compostos iônicos polares fracos ou
não retidos na cromatografia de fase reversa.<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Diferente das colunas de sílica e amino usadas na
cromatografia de fase normal, as colunas HILIC podem ser usadas com fase móvel
orgânica / aquosa. Essa resistência à água da coluna HILIC é muito importante
ou então teremos problemas com alto nível de ruído de linha de base e vida útil
curta da coluna devido à hidrólise da fase estacionária. Portanto, as colunas
usadas na cromatografia de fase normal podem não ser necessariamente usadas na
cromatografia HILIC. O contrário é possível: colunas adequadas para
cromatografia HILIC podem ser usadas em cromatografia de fase normal.<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="color: white;">Vantagens da HILIC<o:p></o:p></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Os solutos polares são preferencialmente retidos em HILIC, o
que significa que muitas substâncias que são pouco retidas na cromatografia de
fase reversa podem ser facilmente separadas usando HILIC.<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">A cromatografia de interação hidrofílica tem várias
vantagens potenciais:<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">● Bom formato de pico para solutos básicos<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">● Ajuda a melhorar a sensibilidade da espectrometria de
massa<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">● Injeção direta de amostras dissolvidas em solventes
orgânicos<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">● Pode suportar fluxos mais altos devido à menor viscosidade
da fase móvel<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="color: white;">Perguntas frequentes sobre o HILIC<o:p></o:p></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Em comparação com a cromatografia de fase reversa, o
problema mais comum na cromatografia de interação hidrofílica é provavelmente o
formato de pico abaixo do ideal (cauda ou cauda frontal). Isso reflete o fato
de que a técnica de separação por HILIC ainda não é amplamente utilizado como a
cromatografia de fase reversa. As colunas HILIC ainda podem usar sílica tipo A como
material de suporte / fase estacionária. Também precisamos continuar a melhorar
as colunas HILIC e encontrar maneiras de melhorar o formato de pico.<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Ao encontrar problemas de formato de pico, a primeira coisa a
se tentar deve ser o aumento da
concentração do tampão na fase móvel. Algumas amostras requerem concentrações
de tampão de até 100 mmol/L para obter um bom formato de pico. Em geral, a
amostra deve ser dissolvida na fase móvel, mas às vezes, para melhorar o formato
de pico, a proporção do solvente orgânico usado para dissolver a amostra pode
ser aumentada. Se o formato do pico ainda não melhorar, considere substituir a
coluna ou ajustar o pH da fase móvel. A fase móvel deve sempre conter uma certa
quantidade de água e a proporção de água deve ser de pelo menos 3% a 5%.<o:p></o:p></span></p>
<span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 11.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: PT-BR; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: Arial; mso-bidi-language: AR-SA; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: Calibri; mso-fareast-language: EN-US; mso-fareast-theme-font: minor-latin; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Algumas colunas de fase ligada apresentam sangramento
de fase estacionária quando analisando com detecção de massa (MS). A solução mais
simples é usar uma coluna de sílica ou coluna de fase ligada diferente. Tem
sido apontado na literatura que, ao usar a cromatografia de interação
hidrofílica, alguns componentes da amostra irão se ligar irreversivelmente à
coluna de sílica. Neste caso, uma coluna HILIC de fase ligada pode ser
considerada.</span></span>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-47273820932551580412022-04-27T11:53:00.000-07:002022-04-27T11:53:15.338-07:00Perguntas e Respostas HPLC - Parte 5<p> </p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhk6_eI6vZduhPjnCi-qq1DXyZAg6UP0iTM0y9ypaMWykgMPlepDyp8iMvdgS7_M6dyrLrDiuonkAyoor8D8O8WYo3vBSmEasKNfJKX0NcVHQNIrhZ3OG4hzCp5-jAwj0SQlsID1dVxNOV-b4YwrAxPBZLlQPj2EZgRXOgLxKlPb_XHFKTwVCSSBq0ZDw/s417/logos_Welch_Chroma.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="132" data-original-width="417" height="101" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhk6_eI6vZduhPjnCi-qq1DXyZAg6UP0iTM0y9ypaMWykgMPlepDyp8iMvdgS7_M6dyrLrDiuonkAyoor8D8O8WYo3vBSmEasKNfJKX0NcVHQNIrhZ3OG4hzCp5-jAwj0SQlsID1dVxNOV-b4YwrAxPBZLlQPj2EZgRXOgLxKlPb_XHFKTwVCSSBq0ZDw/s320/logos_Welch_Chroma.png" width="320" /></a></div><br /><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><br /></div></div><p></p><p class="MsoNormal"> <span style="color: white;"> </span><span style="color: white;">Artigos
Welch / Chromastore Traduzido por
Ronaldo Buissa Netto<o:p></o:p></span></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 20pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Perguntas e Respostas sobre
Cromatografia Líquida</span></span></b></p><br /></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEiNXmgj6mxtDFeNOMQGSr9TS0EBH29O4c5Izj4iP0hz_5vfSxR4-Gpj6gSt2vrwIlErynQhr7NR_4_Acc2g9JlZwiK4yMvpu9ve9ySxweXlitfxWA7H4Bw9uQzc1PYR8f6Pe-K6wmL4U97-m6QIjy3FxXBA2Xyp1J80mgzWY774LLsXgAy4PQ6uozkrpQ/s624/Picture2.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="300" data-original-width="624" height="154" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEiNXmgj6mxtDFeNOMQGSr9TS0EBH29O4c5Izj4iP0hz_5vfSxR4-Gpj6gSt2vrwIlErynQhr7NR_4_Acc2g9JlZwiK4yMvpu9ve9ySxweXlitfxWA7H4Bw9uQzc1PYR8f6Pe-K6wmL4U97-m6QIjy3FxXBA2Xyp1J80mgzWY774LLsXgAy4PQ6uozkrpQ/s320/Picture2.jpg" width="320" /></a></div><br /><div><p class="MsoNormal"><b><span style="color: white; font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-themecolor: background1;">P</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">1:</span></span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">
O que fazer para alterar a seletividade na cromatografia líquida ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Fase móvel<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- O tipo e a proporção de solventes
orgânicos na fase móvel afetarão a seletividade da separação cromatográfica.
Para o modo de cromatografia de fase reversa, os solventes orgânicos comumente
usados são metanol, acetonitrila e tetrahidrofurano. A seletividade e a
resolução podem ser alteradas alterando o tipo de fase orgânica na fase móvel
ou ajustando sua proporção.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- O valor de pH da fase móvel afeta a
resolução. Para compostos neutros, mudanças no pH da fase móvel não terão muito
impacto em sua seletividade; para compostos ácidos e compostos básicos
(compostos dissociáveis), o impacto é maior.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- A força iônica da fase móvel pode
ser ajustada pela adição de sais tampão para melhorar a retenção entre o
composto alvo e a fase estacionária.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Fase estacionária<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">O tipo de fase ligada, o tamanho do
poro da partícula, o tipo de capeamento, o tamanho da partícula e o tamanho da
coluna cromatográfica afetarão os resultados da separação cromatográfica. O
fator mais importante é a seleção da fase estacionária. Quando você não
consegue obter bons resultados de separação com a fase estacionária C18, você
pode considerar a fase estacionária C8 com forte polaridade, ou a coluna
fenil-hexil com grande diferença de seletividade.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Sistema cromatográfico<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Ajustar alguns parâmetros do sistema
cromatográfico também pode melhorar os resultados da separação cromatográfica
até certo ponto. Por exemplo, taxa de amostragem mais alta no seu detector; uma
tubulação de diâmetro interno menor e uma célula de fluxo menor são usadas para
reduzir o volume de difusão e o volume de atraso e reduzir o alargamento dos
picos cromatográficos; Ou melhore a resolução aumentando a temperatura da
coluna cromatográfica.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P2:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
E se a área do pico da amostra ficar menor ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Se a resposta de todos os
componentes mudou aproximadamente na mesma medida, temos algumas possibilidades<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Problema de injeção: verifique o
vial de amostra e a agulha de injeção para garantir que a concentração da
amostra e o volume de injeção não mudaram.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Problema no detector: verifique
todas as configurações de parâmetros do detector. Se o ruído da linha de base
for grande, geralmente não é o detector, mas o sistema cromatográfico está
contaminado.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Se o composto de interesse é estável
e pode se degradar durante a injeção / análise.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Se as condições cromatográficas
mudaram, como fluxo de fase móvel, valor de pH, etc.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Quando a coluna cromatográfica muda,
a seletividade muda e a resposta do detector também muda.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. Apenas alguns compostos apresentam
resposta diminuída<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se eles têm volatilidade
ou grupos funcionais semelhantes. Para compostos quimicamente diferentes, o
olhar é diferente: amostras com grupos funcionais polares (como – OH, – NH, –
SH) são fáceis de serem adsorvidas por uma coluna contaminada, justificando o
problema de diminuição de resposta.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Se as propriedades físico-químicas
desses componentes são estáveis e se ocorre degradação no processo de injeção
/ análise.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P3:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Quando a mesma amostra é injetada repetidamente, por que a área do pico varia ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Há muitas razões para este resultado:<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Se a amostra for estável, primeiro
elimine a falha do instrumento: bolhas é o problema mais comum, a formação de
bolhas altera o volume injetado em cada replicata.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Se as concentrações variarem muito
entre as amostras e a área do pico do composto de interesse permanecer
constante após 2-3 injeções, pode ser resíduo de amostra ficando na coluna.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- A diminuição da área do pico também
pode ser causada pela variação de temperatura, mas o efeito é muito pequeno,
inferior a 2%. Se você retirar a amostra da geladeira e colocá-la no
amostrador, a variação de densidade da amostra depois de atingir a temperatura
ambiente causará a variação de resposta.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- A mudança aleatória da velocidade do
fluxo também levará à mudança da área do pico. Outra causa potencial de
mudanças na taxa de fluxo é o vazamento na parte pressurizada do sistema
cromatográfico, que deve ser fácil de detectar.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Amostras complexas podem apresentar
grupos de picos de difícil separação (pares complexos) e podem dificultar para
o software determinar onde está a linha de base. Utilize sempre os mesmos
valores / limites para os parâmetros do software de integração para melhor a
reprodutibilidade da integração. A própria amostra também causa a alteração da
área do pico. Na cromatografia de fase reversa, algumas proteínas não são
completamente eluidas no gradiente inicial e os resíduos aparecem no gradiente
da injeção de branco seguinte. Esses picos fantasmas estão presentes apenas em
proteínas específicas e procedimentos de eluição específicos. Em caso
afirmativo, adicione um branco após analisar a amostra. Além disso, as
proteínas adeririam irreversivelmente a algumas colunas, e a área do pico da
amostra aumentaria gradativamente com o aumento da injeção da amostra.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P4:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Flutuação de pressão, como ter pressão “estável” no sistema cromatográfico ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
A flutuação de pressão é um problema comum no trabalho diário. De um modo
geral, a relação entre flutuação de pressão e coluna cromatográfica não é
grande, mas o maior suspeito desse problema é o sistema HPLC. Os 2 pontos a
seguir merecem atenção:<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Existem bolhas na bomba;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Vazamento da válvula de retenção
(check valves) ou selos.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">As soluções são as seguintes:<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Desgaseificação ultrassônica após /
durante a filtração do solvente;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Use desgaseificador on-line (a
maioria dos sistemas HPLC`s atuais já possuem sistema de degaseificação online
integrado ou como opcional);<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Purge seu sistema HPLC para a
retirada das bolhas de sua fase móvel;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Limpe e / ou substitua a válvula de
retenção; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Substitua os selos da bomba.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P5:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Como armazenar a coluna HPLC corretamente?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Para períodos curtos de
armazenamento (2-3 dias):<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Coluna de fase reversa: caso utilize
tampão ou fase móvel contendo sais, após a conclusão do experimento, use 20-30
volumes de coluna de uma mistura 10:90 de ACN:H2O ou MeOH:H2O para a lavagem.
Use uma mistura 90:10 de ACN:H2O ou MeOH:H2O por mais 10 a 20 volumes de coluna
para a lavagem final. Se for necessário armazenamento durante a noite, a taxa
de fluxo pode ser mantida em 0,1 a 0,2 mL/min.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Coluna de fase normal: Lave a amostra
com a fase móvel, depois enxágue a coluna com uma alta proporção de
n-hexano:isopropanol e armazene-a.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. Para períodos longos de
armazenamento, a coluna deve ser armazenada em solvente adequado. A coluna de
fase reversa pode ser armazenada em metanol puro ou acetonitrila, a coluna de
fase normal pode ser armazenada em n-hexano puro após desidratação estrita e a
coluna de troca iônica pode ser armazenada em água (contendo o conservante
azida de sódio ou timerosal). Sempre conecte firmemente os plugs cegos nas
extremidades da coluna para evitar evaporação do solvente. Para armazenamento
de colunas cromatográficas especiais, consulte as instruções da coluna e use os
solventes recomendados pelo fabricante.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P6:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Meu pico cromatográfico está demorando para sair, como resolver isso?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Redução / problemas no fluxo de
fase móvel<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique e reajuste o fluxo; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se há bolhas na bomba /
caminho fluídico; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se há vazamento na válvula
de retenção (check valve), nos selos da bomba ou outros componentes do sistema
fluídico pressurizado.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. Alteração da composição da fase
móvel<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se há pontos de vazamento
de líquido no sistema; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Remova as bolhas do sistema; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Reabasteça o(s) frasco(s) de
solvente(s); <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Certifique-se de que seu gradiente
está corretamente programado; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se você está utilizando a
fase móvel pré-misturada ou misturando pelos canais da bomba; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Composição da fase móvel. Na
cromatografia de fase reversa, o fator de retenção K está exponencialmente
relacionado à proporção de fase orgânica na fase móvel. Se sua composição de
fase mudar 1%, seu tempo de retenção pode mudar algo entre 5 – 15%. Uma mudança
de pH de 0,1 levará a uma mudança de tempo de retenção de 10%, portanto, o pH deve
ser medido com precisão e o pHmetro deve ser calibrado. Na cromatografia de
fase reversa, com o aumento do pH, o tempo de retenção de compostos ácidos será
encurtado e o de compostos alcalinos será prolongado; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- A concentração do reagente de
pareamento iônico afetará o tempo de retenção dos componentes do composto
iônico. O tempo de retenção de analitos com carga oposta ao reagente do par
iônico será reduzido e aqueles com a mesma carga serão prolongados;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- O tempo de retenção da cromatografia
de fase normal é muito sensível aos componentes polares na fase móvel. Em
qualquer caso, a água é um problema. <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">3. Perda de fase ligada<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Para colunas cromatográficas de
sílica tradicional, mantenha a fase móvel entre pH 2 - 8; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Para pH muito alto (> 10) ou pH muito
baixo (< 2), use coluna de fase estacionária de alta estabilidade (1,5 – 12)
ou colunas com base polimérica de alta estabilidade.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">4. Sítios ativos na sílica<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Modificadores de fase podem ser
utilizados para competir com os compostos e diminuir a interação de seus
compostos de interesse com os sítios ativos. A melhor solução é o uso de
colunas com maior cobertura (carga de carbono).<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">5. Redução de temperatura<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">Geralmente, o tempo de retenção muda
de 1% a 2% para cada mudança de 1 </span><span style="font-family: "Cambria Math",serif; font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: "Cambria Math";">℃</span><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"> na temperatura. Geralmente, o impacto não é
tão grande. Obviamente, esse problema pode ser evitado usando um forno de
coluna.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P7:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Como resolver o problema de diminuição do tempo de retenção de picos
cromatográficos ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Sítios ativos no empacotamento da
coluna cromatográfica<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Use modificadores de fase móvel para
competir com álcalis (compostos básicos como trietilamina) ou aumente a força
do tampão. O uso de colunas de alta cobertura é uma solução.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. Alteração da composição da fase
móvel<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se há pontos de vazamento
de líquido no sistema; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Remova as bolhas do sistema; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Reabasteça o frasco de solvente; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Certifique-se de que seu gradiente
esteja corretamente programado; <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Verifique se você está utilizando a
fase móvel pré-misturada ou misturando pelos canais da bomba.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">3. Sobrecarga de amostra<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Reduza o tamanho da amostra, use um
diâmetro interno maior ou uma coluna mais longa.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">4. Perda de fase ligada ou base de
sílica <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Use uma fase móvel de pH suave
(3-8); <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Use colunas especiais de sílica,
colunas poliméricas ou colunas resistentes à pH`s extremos.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">5. Coluna cromatográfica velha<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Use colunas de guarda ou colunas
poliméricas / híbridas de alta estabilidade.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P8:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Como verificar se a oscilação da linha de base afeta o resultado das minhas
amostras ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Se a coluna não estiver equilibrada
com a composição de fase móvel, isto resultará em oscilação da linha de base;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. Para instrumentos sem
desgaseificador em linha, quando a fase móvel não estiver completamente
desgaseificada, aparecerão distúrbios na linha de base;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">3. Quando a coluna cromatográfica
estiver suja / contaminada, também causará flutuação da linha de base;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">4. A célula de fluxo do detector está
suja, resultando em absorção instável. Neste momento, as janelas da célula de
fluxo precisam ser limpas;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">5. Quando a energia da lâmpada do
detector é insuficiente, a absorção se tornará instável e a linha de base
geralmente é instável, especialmente em baixos comprimentos de onda;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">6. O comprimento de onda de corte da
fase orgânica na fase móvel deve ser preferencialmente menor que o comprimento
de onda de detecção em mais de 20 nm;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">7. O ambiente do laboratório é
instável (como aumento e diminuição da temperatura, mudança do fluxo de ar,
etc.);<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">8. Problemas com o instrumento também
podem causar flutuações na linha de base, caso em que normalmente ocorre
instabilidade de pressão. Por exemplo, o filtro de garrafa de fase móvel está
entupido, o elemento filtrante da válvula ativa de entrada está entupido, a
válvula unidirecional está bloqueada por contaminantes, o cabeçote da bomba tem
bolhas, vazamento de fase móvel pelo caminho fluídico (conectores / tubulações
danificadas) etc.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P9:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Quanto é a vida útil da coluna cromatográfica?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
A vida útil da coluna cromatográfica é de cerca de 1000 injeções, enquanto a
vida útil da coluna de guarda é de cerca de 280 injeções. É afetado
principalmente por condições cromatográficas e condições de armazenamento.
Sinais de coluna velha: aumento da pressão da coluna, diminuição da eficiência
da coluna, cauda do formato do pico, alargamento do formato do pico, mudança do
tempo de retenção, perda de fase estacionária, etc.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Existem duas condições
cromatográficas básicas:<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Numa mesma análise, a coluna
cromatográfica usada anteriormente tem uma vida útil maior. Neste caso, deve-se
verificar se as condições cromatográficas são consistentes. A composição da
amostra e os contaminantes fortemente absorvidos na amostra destruirão a
eficiência da coluna cromatográfica. Se for confirmado que as condições
cromatográficas não mudaram, pode-se especular que a causa seja o leito
cromatográfico da coluna danificado. Durante a rotina do laboratório e
transporte, a vibração violenta da coluna cromatográfica levará à danos no
leito cromatográfica da coluna;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Todas as colunas cromatográficas
usadas nesta análise são danificadas após o mesmo número de vezes, e o motivo
mais provável é que os componentes da amostra estão adsorvidos na cabeça da
coluna cromatográfica. Podem ser precipitados insolúveis na fase móvel ou
substâncias com forte absorção;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Manuseie as amostras usando técnicas
apropriadas de preparação de amostras. A extração em fase sólida (SPE) foi
realizada com uma coluna de extração em fase sólida semelhante à coluna
analítica;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Use coluna de guarda. A coluna de
guarda é instalada na frente da coluna cromatográfica como coluna de sacrifício
e será substituída em caso de problemas. A tecnologia de empacotamento e
enchimento da coluna de guardao deve ser a mesma da coluna analítica;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. O método de uso está incorreto e
geralmente é raro usar a coluna de acordo com as instruções do fabricante<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- O pH da fase móvel está fora da
faixa de uso, resultando na ligação da coluna, hidrólise da fase ou dissolução
da matriz. Também ocorre quando a amostra é dissolvida com ácido ou álcali
forte;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- A alta temperatura também causará
danos à coluna cromatográfica. Por exemplo, a alta temperatura acelerará a
dissolução da fase ligada;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Cuidados com colunas especiais, como
a coluna amino, podem reagir com aldeídos e cetonas. A coluna amino será
fortemente alcalina em solução aquosa sem tamponamento e dissolverá da sílica
estruturante;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">- Colunas expostas ao solvente errado
também entrarão em colapso. Porque essas colunas são baseadas em uma estrutura
muito delicada. Elas são parcialmente ligadas pela adesão entre as partículas.
Se colocado em uma fase móvel que possa quebrar essa adesão, o leito da coluna
provavelmente colapsará. Esse problema às vezes ocorre quando a coluna de ciano
está em solução neutra e a coluna de fenil está em THF. Esta é outra razão para
não lavar a coluna.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P10:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;">
Análise de causa de pico cromatográficos dividindo ou bifurcando<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">1. Contaminação da coluna<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Não há problema no início, mas após um
período de uso, esse problema pode ser causado pela contaminação. Neste
momento, é necessário reforçar a lavagem da coluna cromatográfica, ou seja,
utilizar um solvente mais forte do que a fase móvel utilizada no método para
lavar a coluna cromatográfica.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">2. A coluna de guarda falha<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Se a matriz da amostra estiver suja,
após um período de uso, problemas como bifurcação de pico ou cauda podem ser
causados pela falha da coluna de guarda. De um modo geral, se o número de
pratos teóricos, pressão ou resolução mudar em mais de 10%, a coluna de
proteção precisa ser substituída. A coluna de proteção é um consumível,
recomenda-se substituí-la diretamente sem regeneração.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">3. A conexão está conectada
incorretamente<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Se houver um problema com a forma do pico
de cada pico durante o uso da coluna cromatográfica, verifique primeiro se há
um problema de conexão. A tubulação pode ser muito longa ou muito curta, o que
pode causar vazamento ou divisão de pico. Se o pivot (ponta da tubulação que se
projeta pra fora da anilha) estiver muito comprida, ocorrerá vazamento. Se o
pivot estiver curto, um volume morto será criado, formando uma cavidade de
mistura, resultando em volume extra coluna e deterioração do formato de pico.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">4. Efeito solvente<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Em cromatografia líquida de fase
reversa, como se utiliza muitas vezes 100 % de solventes orgânico ou 100% de
solvente forte, quando ocorrem injeções de grande volume, o pico cromatográfico
eluirá da coluna prematuramente, resultando em distorção do pico. Para evitar
estes problemas, o ideal é manter a composição de fase móvel mais próxima
possível do diluente das amostras, evitando este tipo de distorção mesmo em
injeções de grandes volumes. <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">5. Sobrecarga de amostra<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Quando o volume de injeção ultrapassa
a capacidade da coluna, o pico da amostra apresenta bifurcação ou cauda, e a
solução é reduzir o volume de injeção.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">6. Colapso da coluna cromatográfica<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">A bifurcação do pico causada pelo
colapso da coluna é difícil de reparar. Se a coluna cromatográfica é sempre
utilizada com pH acima de 7 ou próxima do seu limite de tolerância de pH, a
vida útil da coluna cromatográfica tende a diminuir pois a base de sílica do
leito empacotado se dissolverá e colapsará prematuramente. Se a coluna entrar
em colapso, você verá que a forma de cada pico no cromatograma mudará (cauda de
pico, alargamento ou bifurcação) e poderá correr na direção oposta em pouco
tempo. Recomenda-se substituir a coluna diretamente. Preste atenção para
diminuir a temperatura abaixo de 40°C durante o uso diário, especialmente ao
usar fases móveis de pH alto.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">7. O frit de coluna está parcialmente
bloqueado devido à análise frequente de amostras contaminadas.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Se não houver nenhuma coluna de guarda
ou filtro pré-coluna em linha, é provável que material particulado e adsorventes
fortes bloqueiem o frit na entrada da coluna e a pressão aumente ao mesmo
tempo. A solução é geralmente a retro lavagem da coluna.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">8. O desempenho da coluna
cromatográfica é degradado<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Colunas cromatográficas utilizadas
para analisar diferentes métodos costumam se deteriorar mais rápido se não
forem adequadamente limpas, pois trabalham com analitos muito diferentes,
matrizes mais complexas etc., e após determinado período de uso irão mudanças
sutis, que causarão bifurcação, cauda ou alteração no tempo de retenção.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;">FIM</span><o:p></o:p></span></p><br /></div>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-68944698452968853062022-02-25T06:35:00.002-08:002022-02-25T06:35:58.621-08:00Perguntas e Respostas HPLC Parte 4<p> </p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjqYBFec_8-YlYhYjkZndeLIywXk-4ZB2f-vEI-Tl-YEySe3QmY3pFeXORVtdPS0XzMKMkp7BnmNBtiNkb1ducoY12gI5XFPuuEEzC86D9oymNqs6GBN7Tg1izcMG64oweWJhxM9TJVYePijiQE3TkhYf8ekGXRp2jNRZtFPDYSz-EQUdgqBWdjAxGhPg=s417" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img border="0" data-original-height="132" data-original-width="417" height="101" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjqYBFec_8-YlYhYjkZndeLIywXk-4ZB2f-vEI-Tl-YEySe3QmY3pFeXORVtdPS0XzMKMkp7BnmNBtiNkb1ducoY12gI5XFPuuEEzC86D9oymNqs6GBN7Tg1izcMG64oweWJhxM9TJVYePijiQE3TkhYf8ekGXRp2jNRZtFPDYSz-EQUdgqBWdjAxGhPg=s320" width="320" /></span></a></div><span style="color: white;"><br /></span><p></p><p></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Artigos
Welch / Chromastore<span style="mso-spacerun: yes;"> </span>artigo 25FEV22
Traduzido por Ronaldo Buissa Netto<o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 20pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Perguntas e Respostas sobre
Cromatografia Líquida<o:p></o:p></span></span></b></p><span style="color: white;"><br /></span><p></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjsmVToKWoc6fThT1oDDwOQZlFoGN3ifLu9jfBvoKpil6IwyGLkeflZ1UpefnMbJTWEJkU0x4SJRdSLmT_RNOXSEVpEKGdiJQd9at_jZfOROmFXiBR73z63Cu1pPrRyFYVvUIGDwgLiHU5ICWaBTwFILc-HJAQpyePIKQTBqXrg4DSQ_SVeuBcyyOwk_Q=s1536" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img border="0" data-original-height="739" data-original-width="1536" height="154" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjsmVToKWoc6fThT1oDDwOQZlFoGN3ifLu9jfBvoKpil6IwyGLkeflZ1UpefnMbJTWEJkU0x4SJRdSLmT_RNOXSEVpEKGdiJQd9at_jZfOROmFXiBR73z63Cu1pPrRyFYVvUIGDwgLiHU5ICWaBTwFILc-HJAQpyePIKQTBqXrg4DSQ_SVeuBcyyOwk_Q=s320" width="320" /></span></a></div><span style="color: white;"><br /></span><div><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;">Esta é a parte 4 da série de perguntas e respostas sobre Cromatografia
Líquida que foi publicada anteriormente. Esta parte abordará mais perguntas e
respostas, que o ajudarão a saber mais sobre cromatografia líquida.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">1<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Como podemos evitar cauda no meu pico ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Antes de tudo, precisamos descobrir a causa da
formação de cauda, que geralmente é causado pelos seguintes motivos: efeitos
extra coluna, leito empacotado contaminado e interação entre analito e sítio
ativo na fase ligada, e cada um dos motivos precisa ser tratado separadamente.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">2</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Como identificar a causa da cauda no meu pico ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">O cromatograma pode fornecer muitas pistas para
identificarmos o problema. A natureza da amostra e as condições analíticas
também nos dão informações indispensáveis para isolar este tipo de problema. A
sobrecarga de massa é um dos possíveis problemas da formação de cauda; a
injeção da amostra diluída 1:10 indicará se o formato de pico poderá ser
melhorado somente com esta mudança de concentração. Se a cauda persistir mesmo
em baixas concentrações, observe o cromatograma. Se houver muitos picos no
cromatograma, veja se cada padrão de pico mantém um certo grau de cauda ou tem
uma tendência consistente ao longo do tempo. Se os picos que eluem mais cedo
apresentam mais cauda que os picos mais retidos, considere os efeitos extra
coluna (tubos muito compridos, diâmetros internos incorretos e conexões mal
formatadas são os principais problemas). Se todos os picos no cromatograma
tiverem o mesmo grau de cauda, existem duas possibilidades: 1) danos no leito
empacotado, 2) todas as amostras no cromatograma têm estrutura química
semelhante e a cauda é causada por um efeito químico.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">3</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Quais substâncias produzem esses efeitos químicos,
você pode explicar? Como lidar com isso ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Existem vários efeitos químicos, sendo o mais comum a
interação de analitos com sítios ativos no leito cromatográfico. A cauda de
compostos básicos na coluna de fase reversa é bem comum. Normalmente, compostos
com grupos polares ou básicos como – COOH, – NH2, – NHR, – NR2 podem ter
adsorção secundária entre hidroxilas e silanóis residuais na superfície do
leito empacotado, resultando em cauda.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Soluções:<o:p></o:p></span></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">1)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Para a análise de compostos básicos, a trietilamina
(TEA) pode ser adicionada à fase móvel como agente redutor de cauda. O TEA
compete com o composto básico para ligar o grupo hidroxila ao silanol residual,
minimizando assim as interações entre o analito e a superfície do leito
cromatográfico.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> A cauda de compostos ácidos requer a redução do
valor de pH da fase móvel para protonar o ácido o máximo possível. Ácidos
orgânicos competitivos podem ser adicionados à fase móvel, como o ácido
trifluoroacético (TFA) 0,1%, que tem um melhor resultado pois tem UV cut-off
baixo (comprimento de onda limite onde aquele aditivo começa a apresentar
leitura na região do UV).<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">3)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Aumentar a concentração de sais tampão na fase móvel
para inibir a ação iônica.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">4)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Adicione reagente de pareamento iônico à fase móvel,
concentração 0,003-0,01 mol/L, para otimizar o formato de pico e aumentar a
retenção do composto.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">5)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Escolha colunas de sílica de alta pureza e capeadas,
como: Welch Ultisil® Polar-RP, Xtimate® C18, etc.</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">4</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Em alguns cromatogramas, podemos ver o pico
cromatográfico com cauda frontal. O que causa a cauda frontal em um pico ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Em primeiro lugar, também precisamos encontrar as
razões para a cauda frontal de um pico. A cauda frontal de um pico geralmente
tem os seguintes motivos: volumes extra coluna, leito empacotado contaminado e
efeito do solvente. Isso exige que encontremos a causa e resolvamos o problema
observando o cromatograma. Claro que, no caso de sobrecarga de amostra, também
verificamos reduzindo a concentração da amostra. Se mesmo em baixas
concentrações ainda verificamos a cauda frontal, observe o cromatograma. Se
houver muitos picos no cromatograma, veja se cada tipo de pico mantém um certo
grau de cauda frontal ou se tem uma tendência de mudança consistente com o
tempo, ou seja, picos eluidos mais cedo apresentam mais ou menos cauda frontal
que picos eluidos tardiamente. Se a cauda frontal é mais intensa que a cauda
traseira do pico no cromatograma, devemos considerar tanto os efeitos extra
coluna como também efeitos de solvente. Se o formato da cauda frontal for
semelhante a todos os picos no cromatograma, isso pode ser causado por leito empacotado
danificado ou pelas propriedades químicas das substâncias da amostra a ser
separada.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">5</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Como você resolve a cauda frontal em um pico?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">1)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Para cauda frontal de pico causada pelo efeito do
solvente, em cromatografia de fase reversa, se for usado solvente 100% orgânico
ou 100% modificador de fase forte, o pico cromatográfico será lavado da coluna
cromatográfica prematuramente durante a injeção de grande volume, resultando em
deformação do pico, que pode ser evitada fazendo injeções de volumes menores
com a utilização de fase móvel como diluente, ou diluente com composição
química (polaridade) mais próxima da fase móvel. Se um modificador de fase
forte precisa ser utilizado como diluente, é necessário reduzir o volume de
injeção.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Se a cauda frontal é causada por efeitos extra
coluna, precisamos reduzir o volume morto do sistema cromatográfico e, em
seguida, resolver o fenômeno da cauda frontal.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">3)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Para cauda frontal causada pela natureza da amostra,
pode-se considerar aumentar a concentração de sal tampão na fase móvel,
aumentar a força iônica na fase móvel, ou adicionar uma quantidade adequada de
tetrahidrofurano (THF) na fase móvel (geralmente 5%). Aumentar a temperatura da
coluna também é uma boa alternativa.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">4)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Volume morto na cabeça da coluna - o espaço gerado
pelo dano causado ao empacotamento cromatográfico na cabeça da coluna faz com
que a vazão da fase móvel e do soluto se movam mais rápido do que a vazão
média, resultando em cauda ou extensão de pico. <o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">5)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Coeluição – duas substâncias quimicamente parecidas
não estão separadas, mas aparenta ser uma cauda frontal.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">Análise de
caso de cauda frontal de pico:</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> coluna C18, a fase móvel água-metanol (55:45), a
substância de referência e os picos de amostra são todos encaminhados?<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">1)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Sobrecarga de amostra. Reduza a concentração de
injeção para ver se a forma do pico é melhorada. Geralmente considera-se que a
altura do pico é de cerca de 100 mAU, o que não afetará a forma do pico devido
à sobrecarga.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Verifique se a amostra está dissolvida em fase
móvel. A capacidade de eluição do solvente (como metanol puro) dissolvendo a
amostra é mais forte do que a da fase móvel, e o pico será atrasado. Quando uma
amostra é diluída pela fase móvel, ela apresenta deslocamento uniforme durante
todo o seu percurso de interações com o leito cromatográfico empacotado, pois
fase móvel e amostra apresenta química semelhante. O uso de modificador de fase
forte como diluente altera a maneira que a amostra avança na coluna, alterando
a velocidade de eluição, causando interações não esperadas e efeitos no formato
de pico. <o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">3)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Aumente a concentração de sal tampão na fase móvel.
Aumentar a concentração de sal tampão pode aumentar a força iônica na fase
móvel e reduzir o atraso no deslocamento causado pela ação eletrostática (que
pode existir entre as moléculas da amostra ou entre as moléculas da amostra e a
superfície do empacotamento).<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">4)</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Adicione uma quantidade apropriada de
tetrahidrofurano na fase móvel. A adição de uma pequena quantidade de
tetrahidrofurano à fase móvel pode algumas vezes melhorar a forma do pico e
aumentar a resolução. Muitos cromatografistas conhecem o recurso e o utilizam,
mas seu mecanismo parece raramente ser mencionado. Normalmente, a quantidade
adicionada é inferior a 5%, e uma quantidade maior pode ser adicionada quando
necessário.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">6</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Como a coluna HPLC deve ser ativada ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Verifique sempre o
manual de cuidados de sua coluna antes de seguir qualquer procedimento. </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Para colunas de cromatografia líquida, cada coluna é
testada antes do envio e armazenada no eluente de teste para transporte.
Portanto, no primeiro uso, recomenda-se ativar com uma fase móvel 80:20
(MeOH:H2O), com fluxo moderado (normalmente metade do fluxo do método a ser
utilizado), por aproximadamente 4 horas; em seguida a coluna cromatográfica
pode ser completamente equilibrada com a fase móvel. Se forem usados aditivos
de fase móvel (como tampão ou reagente de pareamento iônico), recomenda-se usar
a fase móvel com a proporção original, mas sem esses aditivos para transição
intermediária, e então substituí-la pela fase móvel da amostra analítica após
10 – 20 volumes de coluna. Para colunas com fases ligadas de cadeia química
curta (por exemplo, C8, fenil, CN), deve-se tomar cuidado para garantir que
elas estejam completamente equilibradas antes de usar a coluna. Isso garante a
repetibilidade e ajuda a evitar desvios no tempo de retenção.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">O solvente de fase normal e o
solvente de fase reversa são imiscíveis, o que não pode ser ignorado. Para uma
coluna recém-adquirida, abra primeiro o manual de cuidados da coluna e seu
certificado de análise e teste para verificar o solvente de armazenamento da
coluna. Se o solvente de armazenamento for imiscível com a fase móvel que você
usará, faça a transição com isopropanol primeiro. Durante o processo de
transição, preste atenção ao aumento da pressão da coluna devido à alta viscosidade
do isopropanol e reduza adequadamente o fluxo. Se a fase móvel contém sais
tampão, primeiro use a fase móvel com a mesma proporção sem sais tampão para
evitar a precipitação de sais tampão</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;">.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">7</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Quando uso a coluna amino para analisar açúcares, por
que o tempo de retenção do analito de interesse é instável e avança
gradualmente ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Isso é causado pelas características da coluna amino.
Ao analisar açúcares, a fase móvel típica da coluna amino é de 60% ~ 90% de
mistura de água:acetonitrila. Durante o uso, a alta concentração de grupos
amino (pH básico) nas lacunas do leito empacotado resultam na hidrólise lenta
da sílica e da fase ligada. Com o passar do tempo, o leito se torna mais
ineficiente, o que levará à mudança do tempo de retenção do analito de
interesse. Ao mesmo tempo, isso explica o porquê a vida útil de uma coluna
Amino diminui em condições de fase reversa.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">8</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Alta pressão de coluna ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">O aumento de pressão da coluna cromatográfica é um
problema comum na rotina dos analistas de cromatografia líquida, e um
entupimento é um dos primeiros suspeitos. As principais razões para o aumento
da pressão são resumidas da seguinte forma:<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> O frit na entrada da coluna cromatográfica está
parcialmente entupido;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> A amostra ou sal tampão da fase móvel precipita na
coluna cromatográfica;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Contaminação da coluna cromatográfica;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> A viscosidade da fase móvel é muito alta;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> O filtro em linha ou a coluna de guarda está
entupida;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Entupimento de tubulação;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Coluna polimérica: inchaço causado pela mudança de
solvente.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Soluções:<o:p></o:p></span></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">1-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Lave a coluna cromatográfica por retrolavagem
(backflush) com um ~ 1/4 do fluxo de trabalho sem conectar o detector para
remover o entupimento do frit (exceto para coluna cromatográfica de partículas
de 1,8μm – colunas UHPLC).<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Tente usar a fase móvel como solvente da amostra
para reduzir a possibilidade de precipitação da amostra. Reduza ao máximo a
concentração de sal na fase móvel. Após o uso da fase móvel com sal, a coluna
deve ser lavada com 10 a 20 volumes de coluna de água ultrapura e fase orgânica
na mesma proporção do sal na fase móvel, e então armazenada em solvente
adequado.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">3-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> A coluna cromatográfica está contaminada e precisa
ser limpa e regenerada.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">4-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Tente escolher um solvente de baixa viscosidade como
fase móvel ou aumente a temperatura da coluna.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">5-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Verifique o frit do filtro em linha e o cartucho da
coluna de guarda e substitua-os necessário.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">6-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Desmonte a tubulação para verificação se a pressão
cai e substitua se necessário.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">7-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Para colunas à base de polímeros, são necessárias
informações sobre a compatibilidade do solvente.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">9<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Pressão baixa na coluna ?</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">Quando a pressão da coluna cromatográfica diminui, um
“vazamento” deve ser considerado primeiro. As principais razões para o
aparecimento de baixa pressão são resumidas a seguir:<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">1-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> O elemento filtrante de entrada de solvente está
bloqueado (filtro de garrafa do solvente);<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Vazamento no sistema pressurizado (parafusos,
anilhas, tubulações, selos de bomba, válvulas de injeção, assentos de agulham
entre outros componentes);<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">3-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Mudança de solvente ou fluxo;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">4-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> A válvula de entrada da bomba falha (check valve de
entrada);<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">5-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> A válvula de saída da bomba falha (check valve de
saída);<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">6-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Leito empacotado da coluna cromatográfica danificado
e perda de fase estacionária.<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Solução:<o:p></o:p></span></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">1-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Verifique todas as tubulações, conectores e
componentes do sistema fluídico pressurizado;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Substitua a coluna cromatográfica;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">3-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Verifique se as condições cromatográficas mudaram;<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">4-</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"> Verifique se o fluxo da bomba é preciso.</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">10</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> </span><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">O que é volume morto e volume de atraso da fase
líquida ?<o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> <o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">1) Volume
morto<o:p></o:p></span></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Refere-se ao volume entre o
ponto de injeção efetivo ao ponto de detecção efetivo que exclui a porção da
coluna que contém a fase estacionária. Consiste em 4 partes: o volume do tubo
do injetor à coluna cromatográfica, o espaço entre as partículas da fase estacionária
na coluna (ocupada pela fase móvel, Vm), o volume do tubo de saída da coluna e
o volume da célula de fluxo do detector. Entre eles, apenas Vm participa do
processo de equilíbrio cromatográfico, e as outras três partes apenas
desempenham um papel no alargamento do pico. Para minimizar este problema de
alargamento do pico, o volume dessas três partes deve ser minimizado ao máximo.<o:p></o:p></span></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></strong></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 14pt; line-height: 107%;">2) Volume de
atraso</span></strong><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><o:p></o:p></span></strong></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><strong><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; font-weight: normal; line-height: 107%; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: "Times New Roman"; mso-fareast-language: PT-BR; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">O volume de atraso refere-se ao
volume entre o ponto de mistura do solvente (geralmente na câmara de mistura /
mixer ou válvula proporcionadora de gradiente / GPV / MCGV de um cromatógrafo
líquido) e a cabeça da coluna cromatográfica.</span></strong><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-bidi-font-family: Calibri; mso-bidi-theme-font: minor-latin;"><o:p></o:p></span></span></p><br /></div>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-65321705433414401192022-02-11T10:30:00.002-08:002022-02-11T10:30:38.149-08:00Perguntas e Respostas HPLC Parte 3<p> </p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjI3i_m8eZMRuyadHMINwiEgOc773b2P_rDzfTr97IAf5MwQ68q3Y58PFAu3sVteZX7orz4feUe_SNX0xlcS-XyiNjP6Dk3w362mPrvYwaF3DTrO-xtr1hdLjvnDHfB1ofZ4OjFrNFpFudSyG8k0-YzD1QMBOSEsiirNgUlJBlsyB6LACM6CQvmbOCKIA=s1536" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="739" data-original-width="1536" height="154" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjI3i_m8eZMRuyadHMINwiEgOc773b2P_rDzfTr97IAf5MwQ68q3Y58PFAu3sVteZX7orz4feUe_SNX0xlcS-XyiNjP6Dk3w362mPrvYwaF3DTrO-xtr1hdLjvnDHfB1ofZ4OjFrNFpFudSyG8k0-YzD1QMBOSEsiirNgUlJBlsyB6LACM6CQvmbOCKIA=s320" width="320" /></a></div><br /><p></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white; mso-no-proof: yes; mso-themecolor: background1;"> </span><span style="color: #f3f3f3;"> </span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Artigos
Welch / Chromastore artigo 11FEV22
Traduzido por Ronaldo Buissa Netto<o:p></o:p></span></p><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"> </span></span></b></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;">
</span></span></p><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 20pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Perguntas e Respostas sobre
Cromatografia Líquida<o:p></o:p></span></span></b></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;">Esta é a parte 3 da série de perguntas e respostas sobre Cromatografia
Líquida que foi publicada anteriormente. Esta parte abordará mais perguntas e
respostas, que o ajudarão a saber mais sobre cromatografia líquida.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">1<o:p></o:p></span></span></b></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Qual solvente é
adequado para armazenar colunas de sílica gel utilizadas em cromatografia de
fase normal ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Não importa se o
período de armazenamento é curto ou longo, indicamos o uso de uma fase móvel geralmente
composta por n-hexano e uma pequena quantidade de isopropanol (95:5 / 99:1 / 99,5:0,5).<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">2</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Por que os
tamponamentos com fosfatos diminuem a vida útil da coluna cromatográfica ?
Comparado com outros tampões, quanto o uso do tampão fosfato reduz a vida útil
da coluna ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Em primeiro lugar,
precisamos corrigir um mal-entendido. Para colunas cromatográficas, um pH > 6,5
não é um “ambiente neutro” como todos entendem. Quando o pH do sal tampão é
superior a 6,5, é um ambiente alcalino para a coluna cromatográfica, por isso é
prejudicial à matriz de sílica. Além disso, a molécula de fosfato é pequena, o
que facilita sua entrada na fase ligada, resultando na hidrólise destas
ligações entre base estruturante de sílica e a fase ligada. Devido às vantagens
insubstituíveis do tampão de fosfato, como propriedade estáveis, excelente capacidade
de tamponamento, entre outras, este é um dos sais mais utilizados no
cromatografia líquida, o que obriga os usuários a aceitarem que uma coluna
cromatográfica terá sua vida útil diminuída devido ao uso rotineiro deste sal.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">3</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Como os reagentes
de pareamento iônico funcionam na cromatografia de fase reversa por pareamento
iônico ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Em primeiro lugar,
a extremidade polar do reagente de pareamento iônico se associa ao íon alvo formando
um complexo para reduzir sua polaridade, para que possa ser melhor retido na
coluna cromatográfica. Além disso, de acordo com a teoria do efeito
hidrofóbico, a extremidade hidrofóbica do reagente de pareamento iônico
interage facilmente com a cadeia C18 (ou outro grupo apolar presente na superfície
da sílica), por isso é mais fácil conseguir retenção na coluna. Portanto, a
ação do reagente de pareamento iônico é um mecanismo de retenção misto, ou
seja, a atuação do pareador iônico na formação do complexo entre analito e
pareador e a sua atuação “mascarando” os grupos polares presentes no analito.
Essas duas ações ocorrem juntas.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">4</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Qual é a diferença entre
o reagente do pareamento iônico tetrabutilamônio e o alquil sulfonato de sódio ?
Por que o tetrabutilamônio tem uma influência tão grande na vida útil da coluna
cromatográfica ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> O tetrabutilamônio como pareador iônico
não é tão utilizados quanto os reagentes de pareamento iônico de alquil
sulfonato de sódio. A razão é que as substâncias polares ácidas podem
facilmente melhorar a capacidade de retenção na cromatografia de fase reversa,
reduzindo o valor do pH. A redução do pH pode inibir a ionização do ácido,
tornar o ácido em estado neutro e aumentar a interação com a cadeia de carbono
hidrofóbica. Os analitos alcalinos são seriamente afetados pelo limite superior
do pH da matriz de sílica, e é difícil ajustar o pH da fase móvel para muito
alto. Portanto, reagentes de pareamento de cátions são frequentemente
adicionados em pH baixo ao analisar compostos alcalinos. Experimentos mostram
que os reagentes de pareamento iônico tetrabutilamônio são mais difíceis de remover
da superfície de empacotamento da coluna do que o pareador alquil sulfonato de
sódio e outros reagentes de pareamento de cátions, por isso a desgaste intenso
e prematuro da vida útil da coluna cromatográfica.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">5</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Por que o tempo de
retenção muda para a mesma coluna cromatográfica, depois de terminar o Projeto
A e depois o Projeto B ? Por que a forma do pico é anormal ? O que vai
acontecer ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> A coluna
cromatográfica está contaminada por substâncias de forte retenção, ou seja,
após a interação do contaminante com o leito empacotado, o tempo de retenção é
adiantado ou atrasado. A identificação do problema depende da natureza do contaminante
e da ação conjunta do analito, fase estacionária e contaminante na superfície
da coluna, e quanto mais complexa essa interação, mais difícil prever os
resultados experimentais futuros. Durante a manutenção de rotina, preste
atenção à retrolavagem e a limpeza dos contaminantes com solvente que possa
dissolvê-los após a sua análise, de modo a reduzir ou evitar esta situação.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">6</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Qual é o objetivo
da derivatização pré-coluna por HPLC?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> O método de
derivatização química na tecnologia cromatográfica refere-se ao método de
separação e detecção após a mudança dos componentes da amostra em derivados
correspondentes com reagentes químicos especiais (geralmente referidos como
reagentes de derivatização) no processo cromatográfico. O objetivo é: 1.
Melhorar a sensibilidade de detecção através da introdução de grupos funcionais
de forte absorção no ultravioleta-visível no analito a ser detectado ou
adicionando grupos fluorescentes para convertê-los em derivados fluorescentes;
2. Melhorar a separação e seletividade de amostras analíticas.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">7</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Quando tenho vários
analitos difíceis de separar, como melhorar a separação selecionando a coluna
apropriada ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Três fatores
principais influênciam na separação: eficiência da coluna, seletividade e fator
de retenção. A eficiência da coluna pode ser melhorada reduzindo o tamanho de
partícula do leito empacotado e aumentando o comprimento da coluna; a
seletividade está relacionada com a seleção da fase estacionária e condições de
pH. A seletividade pode ser melhorada selecionando a coluna cromatográfica
apropriada e pH apropriado; O fator de retenção está relacionado principalmente
à composição e proporção da fase móvel; além disso o pH e a força iônica da
fase móvel afetam o estado existente do analito de interesse e também afetam o
fator de retenção. Às vezes, aumentar o fator de retenção também pode melhorar
a separação.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">8</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Quando devo
considerar o uso de colunas Fenil e colunas Ciano?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> As colunas Fenil
tem alta seletividade para a determinação de compostos aromáticos contendo anel
benzênico. As colunas CN pode ser usadas como uma coluna de fase reversa com a
capacidade de retenção mais fraca ou uma coluna de fase normal com atividade
reduzida.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">9<o:p></o:p></span></span></b></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Tenho o mesmo tipo
de coluna em diferentes comprimentos e tamanhos de partículas. Como escolher
entre elas ?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> O comprimento e o
tamanho da partícula são usados para alterar a eficiência da coluna (quanto
mais comprida a coluna, mais eficiente; quanto menos o tamanho de partícula,
mais eficiente). Quando o número de substâncias a serem separadas é ≤ 5, a
coluna cromatográfica com comprimento de coluna de 150 mm pode atender a
separação da maioria das amostras.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">10</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> Uma coluna C18
comum pode ser usada como coluna cromatográfica de fase normal ? Que tipo de
coluna cromatográfica é a mais comum e a mais usada na cromatografia de fase
normal? O que deve ser observado no uso da coluna de fase normal em comparação
com a coluna de fase reversa?<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;"> </span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-no-proof: yes;"> O modo de separação
da cromatografia de fase normal significa que a polaridade da fase estacionária
é maior que a da fase móvel. Na cromatografia de fase reversa, a polaridade da
fase móvel é maior que da fase estacionária. A fase estacionária C18 é
relativamente hidrofóbica. Hidrofobicidade forte significa que a polaridade é
muito fraca. Não deve haver fase móvel com polaridade mais fraca do que ela.
Além disso, ao usar a coluna cromatográfica, deve-se notar que a fase
estacionária polar deve evitar o solvente polar tanto quanto possível, e a fase
estacionária não polar deve evitar o solvente não polar o máximo possível, caso
contrário, o efeito da “miscibilidade semelhante” pode ocorrer (eluição
demorada / longos tempos de retenção).<o:p></o:p></span></span></p><p>
<span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: PT-BR; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: Arial; mso-bidi-language: AR-SA; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: Calibri; mso-fareast-language: EN-US; mso-fareast-theme-font: minor-latin; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-no-proof: yes;"><span style="color: white;">As colunas de fase normal mais
comuns incluem as colunas de sílica, coluna amino, coluna CN e coluna à base Diol.
A coluna mais comum deve ser a coluna de sílica gel. A coisa mais importante a
se prestar atenção quando utilizando uma coluna de fase normal é com relação a
água. A coluna de fase normal é muito sensível à umidade / água. A pequena
alteração do teor de umidade / água na fase móvel tem grande influência no
tempo de retenção. Portanto, o tempo de equilíbrio de uma coluna de fase normal
pode variar de algumas horas ou até mais.</span></span></p>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-26850493339863956142022-01-20T05:22:00.001-08:002022-01-20T05:22:12.089-08:00Perguntas e Respostas HPLC - Parte 2<p> </p><p class="MsoNormal" style="text-align: center;"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Perguntas e Respostas sobre
Cromatografia Líquida<o:p></o:p></span></span></b></p><p class="MsoNormal"><b><span style="color: white;"></span></b></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><b><span style="color: white;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjumShC4lzo4W1J-696vxAzMqNLOgXIlD7wMN6h-rUwaaRQkJPyzQYq3j-O6JoohIfSQU8PdWLCtqQxPmXk7cMTvZ8BsgXKFL0PW4sLUc_kVvL1oMY0XqtOqcD-MhWGHpZYWWwUP41xmZTWBtVCdiBaiiR9izDz45Wi3aydxslmnJlxyBo1ULxEDaRCQw=s624" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="301" data-original-width="624" height="154" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/a/AVvXsEjumShC4lzo4W1J-696vxAzMqNLOgXIlD7wMN6h-rUwaaRQkJPyzQYq3j-O6JoohIfSQU8PdWLCtqQxPmXk7cMTvZ8BsgXKFL0PW4sLUc_kVvL1oMY0XqtOqcD-MhWGHpZYWWwUP41xmZTWBtVCdiBaiiR9izDz45Wi3aydxslmnJlxyBo1ULxEDaRCQw=s320" width="320" /></a></span></b></div><b><span style="color: white;"><br /></span></b><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">1<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Como as novas tecnologias de coluna, como endcapped, novos tipos de empacotamento,
entre outros, se refletem nas aplicações do dia-a-dia ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> A tecnologia presente atualmente nas colunas cromatográfica inclui a preparação
do material para empacotamento, proteção das terminações da base estruturante
(endcapping), etc. Nem é preciso dizer que a tecnologia de empacotamento tem
uma influência decisiva no desempenho de separação e na seletividade da coluna
cromatográfica; além disso a diferença de densidade da fase ligada do
empacotamento cromatográfico também afetará quanto de silanol fica exposto na
superfície do material empacotado, influenciando diretamente na seletividade da
coluna. A tecnologia de endcapping utiliza reagentes que diminuem o número de
silanóis expostos na superfície do material empacotado, causando grande impacto
nas propriedades químicas da coluna cromatográfica, como aumento da faixa de
tolerância de pH, melhor tolerância com fases aquosas, diferente polaridade,
etc. A tecnologia de empacotamento de uma coluna não é tão simples quanto se
imagina. Diferentes fases estacionárias, diferentes diâmetros de partícula,
diferentes diâmetros internos e comprimentos <span style="mso-spacerun: yes;"> </span>da coluna apresentam diferentes técnicas de empacotamento.
Formar um leito empacotado de coluna compacto, estável e uniforme requer muita
experiência.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">2<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Em que circunstâncias o frit da coluna precisa ser substituído ? A
substituição do frit reduzirá a vida útil da coluna cromatográfica?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"><span style="mso-spacerun: yes;"> </span>R:
Se o frit da coluna cromatográfica ou o leito empacotado na ponta da coluna
estiverem contaminados pela amostra, é necessário substituir o frit e parte do
recheio do empacotamento da coluna. A Welch Materials Inc não recomenda que os
clientes desmontem os parafusos da cabeça da coluna por conta própria. É melhor
enviá-los de volta ao fabricante para manutenção. A substituição do frit e do
recheio da cabeça da coluna cromatográfica não afetará a vida útil da coluna
HPLC.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">3<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Se a coluna for retirada de uso e ficar inativa por muito tempo, que cuidados<span style="mso-spacerun: yes;"> </span>precisam ser tomados ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Para uma coluna comum de fase reversa, após a lavagem, condicione a
mesma em metanol puro (ou acetonitrila) ou cerca de 80:20 de MeOH:ACN, em
seguida, tampe as duas extremidades da coluna com os conectores cegos para
evitar a volatilização do solvente de preservação. Quando for retomar o uso da
coluna, reative a mesma seguindo o manual da coluna antes do próximo uso.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">4<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> É indicado o uso de coluna de guarda em meus experimentos ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> O uso de coluna de guarda certamente ajudará você a proteger a sua
coluna analítica de entupimentos por algum material particulado. Se a coluna de
guarda estiver bem conectada, for compatível e substituída com frequência, isso
não afetará a separação e a eficiência da coluna analítica. Tenha cuidado ao
escolher o cartucho da coluna de guarda; escolha um cartucho que seja compatível
com o material da coluna analítica, caso contrário, é muito provável que isso afete
a análise dos seus compostos de interesse.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">5<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Uma bomba quaternária é usada nas seguintes condições: A: 50% de
metanol; B: 50% de água. Por que muitas vezes o sistema para ou entra bolhas?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> A proporção H2O:MeOH 55:45 apresenta os valores mais altos para pressão
e viscosidade na coluna. A proporção 50:50 está bem próximo desse valor extremo
e a pressão da coluna é relativamente alta. Mas a maior influência na pressão
da coluna é o tamanho da partícula do material empacotado e o diâmetro interno
da coluna cromatográfica. O filtro de entrada da bomba não consegue manter o
suprimento de fase móvel necessária, criando diferença de pressão e aumentando
a possibilidade de formação de bolhas. O desligamento do sistema também pode
ocorrer pois muitos equipamentos monitoram a variação de pressão da bomba,
variação esta que aumenta muito quando uma bolha entra no sistema pressurizado
de bombas. Considere substituir o filtro de entrada da bomba por filtros de
maior fluxo.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">6</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Você pode dar uma breve descrição dos quatro métodos de enchimento /
empacotamento de colunas para cromatografia líquida ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Os dados mostram que em condições normais, quando o tamanho da partícula
de enchimento é > 20 µm, o método de enchimento / empacotamento de coluna
seco é mais apropriado; quando as partículas são menores que 20 µm, o
empacotamento úmido é o ideal. Geralmente, existem quatro métodos de empacotamento:<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span lang="EN-US" style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">①</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> O método de homogeneização em alta pressão é usado
principalmente para o empacotamento de colunas analíticas e colunas de preparação
de pequena escala;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span lang="EN-US" style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">②</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Método de pressão radial;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span lang="EN-US" style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">③</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> O método de compressão axial é usado principalmente para
empacotar colunas de grande diâmetro, como as colunas DAC (colunas de
compressão axial dinâmica);<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span lang="EN-US" style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">④</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> O empacotamento de coluna à seco é altamente técnico e a
maioria dos laboratórios fabricantes utilizam esse método para colunas
comerciais.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">7</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Se eu usar conectores / parafusos de PEEK ao invés de conectores de aço
inoxidável, eu consigo resolver completamente os problemas de compatibilidade
das conexões entre os diferentes fabricantes ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> A maioria dos conectores de coluna não são produzidos pelos próprios
fabricantes de coluna. Existem muitos fornecedores, como Valco, Parker, etc.
que fornecem para os grandes fabricantes de cromatógrafos líquidos e colunas.
As medidas não são unificadas entre estes fornecedores, o que causa muitos
problemas de padronização. Com o uso de novas tecnologias, como tubulações e
conectores em PEEK, se torna mais fácil a solução destas incompatibilidades,
evitando vazamentos, formação de volume morto, etc.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span> </span></o:p></span><span style="font-size: 14pt;">8</span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Ao analisar drogas polipeptídicas (fase móvel A: solução aquosa de TFA
0,1% ou 1%, fase móvel B: solução de acetonitrila TFA 0,1% ou 1%), a flutuação
da linha de base é grande, mas rodando esta análise sem TFA eu tenho uma boa
linha de base, porém não consigo ver meus picos de interesse.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Esta flutuação da linha de base é claramente causada pela adição de TFA
à fase móvel e ao gradiente. O TFA é superior a outros modificadores iônicos
porque é volátil e pode ser facilmente removido das amostras preparadas. Por
outro lado, o pico máximo de absorção UV de TFA é inferior a 200 nm, portanto,
é propenso a interferência de linha de base em comprimentos de onda baixos. As
causas para este problemas são muitas mas uma solução mais prática é o uso de
outro modificador de fase móvel. <span style="mso-spacerun: yes;"> </span><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">9<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> Como limpar a coluna após usar a fase móvel contendo TFA?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">R:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> O uso de TFA como um reagente de pareamento iônico na separação de
peptídeos e proteínas por cromatografia de fase reversa é um método comum. O
TFA na fase móvel interage com a fase ligada hidrofóbica e com grupos polares
residuais na superfície de várias maneiras para melhorar o formato do pico e
superar os problemas de alargamento e cauda do pico. Como o TFA também é um
reagente de pareamento iônico, é melhor também limpar a coluna usando o
procedimento de limpeza de colunas indicado para este tipo de modificador, ou
seja, retrolavar a coluna com MeOH: H2O (50:50) durante a noite em uma taxa de
fluxo baixa. Para analisar amostras proteicas, é recomendado o retrolavagem
durante a noite em fluxo baixo (10 % do fluxo de trabalho) com uma solução
MeOH-ACN / H2O / TFA (50 / 50 / 0,1).<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p><span> </span></o:p></span><span style="font-size: 14pt;"> </span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">10<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">P:</span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"> De acordo com a farmacopéia, o tamanho dos poros dos materiais de
empacotamento da coluna é 300Å para amostras com peso molecular maior que
2.000. Qual será a diferença de resultados analíticos entre 300Å e 100Å de
tamaho de poro ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">R:</span></span><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"> Ao analisar amostras de polipeptídeos, o tamanho de poro de 300Å do
material empacotado certamente terá uma seletividade melhor do que o tamanho de
poro de 100Å, ou seja, o grau de separação será bom. Como o peso molecular da
proteína é > 2.000, será difícil entrar no poro do empacotamento de 120Å,
então não há retenção, o analito permanece apenas na superfície do
empacotamento e sai com o solvente. Ao escolher sua coluna, geralmente exigimos
que o tamanho do poro seja pelo menos três vezes o diâmetro molecular para
garantir que as moléculas possam entrar no poro.</span><o:p></o:p></span></p><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"></span></b><p></p>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-3769271796389859072021-12-13T04:43:00.002-08:002021-12-13T04:45:42.781-08:00<p> </p><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Perguntas
e Respostas sobre Cromatografia Líquida<o:p></o:p></span></span></b></p><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"><br /></span></span></b></p>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjPL1KB6YPFbXQHnNlFhiz7QEn3BnybKDUbfwKKczbCgWG16uC97F89qUdZ_0VV1dOrAWoAX-fsxv3gI-sf2wjdDQMrtA24AAt6VGW0VKQQKH1CalKvDQBO19NoxupS9ImiJqzAWlfmO5P3/" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img alt="" data-original-height="311" data-original-width="624" height="159" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjPL1KB6YPFbXQHnNlFhiz7QEn3BnybKDUbfwKKczbCgWG16uC97F89qUdZ_0VV1dOrAWoAX-fsxv3gI-sf2wjdDQMrtA24AAt6VGW0VKQQKH1CalKvDQBO19NoxupS9ImiJqzAWlfmO5P3/" width="320" /></span></a></div><span style="color: white;"><br /></span><p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">1<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b>
<span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">Quais são as vantagens da
Cromatografia Líquida (LC) sobre a Cromatografia Gasosa (GC) ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="mso-spacerun: yes;"> </span><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">A Cromatografia Líquida apresenta algumas vantagens com relação a
Cromatografia Gasosa, pois tem uma faixa de aplicação muito mais ampla. A
Cromatografia Gasosa, de maneira geral, se limita apenas a analisar substâncias
de baixo peso molecular que são facilmente vaporizadas e visa principalmente as
matérias-primas químicas fundamentais. Mas qualquer substância solúvel em
solvente, variando de dezenas a centenas de milhares de unidades de peso
molecular, podem ser analisadas por Cromatografia Líquida. Em produtos
farmacêuticos, químicos, proteção ambiental, alimentos e muitos outros campos
importantes, a Cromatografia Líquida se tornou uma ferramenta analítica líder.
Existem também algumas circunstâncias em que ambas as técnicas podem ser
aplicadas, mas a preparação da amostra para LC é mais simples. O surgimento da
Cromatografia Líquida compensou falhas da técnica de GC a A aparência do LC
compensa o defeito de que o GC, como não poder ser usado diretamente para
analisar compostos voláteis ou na análise de compostos termolábeis e polímeros.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">2<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b>
<span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">Os analistas de laboratório
costumam duvidar se a coluna cromatográfica de LC pode ser limpa utilizando a
técnica de retrolavagem ( em Inglês, backflush -quando a limpeza da coluna e
feita invertendo o sentido do fluxo). Que tipo de coluna pode ser limpa
utilizando esta técnica ? E qual coluna não pode? Após a retrolavagem, a coluna
deve ser usada na direção normal?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Geralmente, as colunas de fase
normal e de fase reversa podem ser limpas por retrolavagem. Mas a retrolavagem
não pode ser usada em colunas que apresentam frita de entrada e saída com
tamanho de poro assimétrico, colunas fabricadas desta maneira são incomuns nos
dias atuais. A retrolavagem visa retirar os contaminantes da coluna de maneria
fácil e rápida, por isso é melhor usar a coluna na direção normal para evitar
contaminação em ambas as extremidades. A maioria das colunas Welch podem ser limpas
por retrolavagem, e recomendamos o uso de colunas na direção normal e a limpeza
na direção oposta.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">3<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Alguns fabricantes usam um tamanho
de poro maior (2 ~ 5 μm) na frita de entrada para evitar o entupimento, com
isso a retrolavagem irá remover material do leito empacotado. O tamanho dos
poros das fritas de entrada e saída serão informados nas instruções de uso da
coluna ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Se o tamanho dos poros das fritas de
entrada e saída da coluna forem assimétricos, o fabricante certamente o
mencionará nas instruções. O tamanho dos poros das fritas de entrada e saída das
colunas Welch é simétrico.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">4<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> A coluna deve ser conectada ao
detector durante o retrolavagem?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> O retrolavagem significa conectar a
coluna ao sistema na direção oposta. Teoricamente, a coluna pode estar
conectada ou desconectada do detector. No entanto, durante a retrolavagem, todo
o material particulado retido pela frita da coluna irá se movimentar no caminho
fluídico e caso o detector esteja conectado, corre-se o risco aumentado de
entupimento de partes sensíveis do detector. Por esta razão, é recomendado não
conectar o detector durante a retrolavagem e colocar a tubulação de saída da
coluna diretamente no seu descarte de solventes.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">5<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Ao usar a coluna de troca iônica
para fazer o desenvolvimento analítico de uma metodologia, e acetonitrila (ACN)
e água como fase móvel, verificou-se que RT (tempo de retenção) é de 2,5
minutos com 60% de ACN e o RT permanece o mesmo com 30% ou 40% de ACN; mas o RT
repentinamente muda para cerca de 13 minutos com 20% de ACN durante o processo
de ajuste do gradiente. Qual é o motivo?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> O mecanismo de retenção das colunas
de troca iônica é principalmente a interação eletrostática. Os principais
fatores de influência incluem força iônica, pH, interação secundária de
ligações de hidrogênio e exclusão molecular. Portanto, na cromatografia de
troca iônica, o mecanismo de retenção não é tão simples quanto a cromatografia
de fase reversa, nem sua atuação é clara somente alterando a proporção da fase
orgânica. É necessário considerar se o aumento da proporção de fase aquosa leva
à mudança da força iônica da fase móvel ou aumenta as interações das pontes de
hidrogênio. Além disso, se a matriz da coluna de troca iônica é sílica gel ou
polimérica, temos também tem efeitos diferentes.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhe235S6j77aWQXoy2_I5RMCX1-BucMilxSnQSBlTHoSQwT5EZxegNvMHDKl8B1_4tVOThqDyiWqCv4X7VhvR2TPjrQn9uM8fjsOZZlWD9p5BnBzAEJ9IGD2Hg4x7I3eTxvfoIx_VXlcAMq/" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img alt="" data-original-height="220" data-original-width="220" height="240" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhe235S6j77aWQXoy2_I5RMCX1-BucMilxSnQSBlTHoSQwT5EZxegNvMHDKl8B1_4tVOThqDyiWqCv4X7VhvR2TPjrQn9uM8fjsOZZlWD9p5BnBzAEJ9IGD2Hg4x7I3eTxvfoIx_VXlcAMq/" width="240" /></span></a></div><span style="color: white;"><br /><span style="font-size: 12pt;"> </span></span><p></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">6<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Para uma coluna C18 usada em minha
rotina, como ativar e manter esta nova coluna? Por que eu deveria ativar uma
coluna nova ?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> A ativação da nova coluna é na
verdade um processo de equilíbrio. Durante o transporte e armazenamento da
coluna, o solvente na coluna pode volatilizar, resultando em um leito
empacotado seco. Como a fase ligada não está totalmente “molhada”, a coluna
precisa ser ativada. As colunas Welch podem ser ativadas de acordo com as
instruções. Além de equilibrar com a fase móvel, às vezes é necessário equilibrar
a nova coluna com as amostras testadas. O método de equilíbrio específico
também é muito simples, basta aumentar a concentração da amostra injetada ou fazer
múltiplas injeções enquanto a eluição não estiver completa. O objetivo de
equilibrar uma nova coluna é saturar a capacidade de adsorção dos sítios ativos
presentes na superfície do leito empacotado de sílica com adsorção não
específica.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">7<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> A coluna C18 será ativada com
metanol utilizando fluxos baixos. Qual é o propósito disso?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> A coluna C18 será ativada com
metanol utilizando fluxos baixos, pois a solução de armazenamento pode
volatilizar no processo de armazenamento e transporte. A baixa taxa de fluxo de
metanol pode infiltrar-se bem na fase estacionária, fazendo com que a fase
ligada se estique bem. Depois de equilibrar o sistema com solvente, o
cromatograma pode ser obtido mais rapidamente por múltiplas injeções ou
aumentando o volume da injeção. Desta forma, os sítios ativos na coluna podem
saturar com amostras para evitar fenômenos anormais.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">8<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Eu tinha acabado de instalar uma
nova coluna C18 outro dia e lavei com metanol 100% por mais de meia hora antes
da injeção. Se eu só lavar meia hora e começar a usar, tudo bem? Isso afetará o
pico?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Em primeiro lugar, se for apenas a
ativação de uma nova coluna, recomenda-se seguir rigorosamente as instruções do
fabricante; em segundo lugar, nem todas as determinações requerem saturação da
coluna nova. No entanto, é um bom hábito injetar várias vezes de acordo com o
método e iniciar a determinação formal após garantir que o tempo de retenção do
pico de interesse esteja estável.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">9<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Quais colunas são geralmente usadas
para a determinação de peptídeos? Se a fase móvel inclui acetonitrila, água e um
pouco de TFA (ácido trifluoracético), ou preciso analisar peptídeos de cadeias
curtas, que coluna devo escolher?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Os polipeptídeos com baixo peso
molecular podem geralmente ser determinados por colunas convencionais C18 ou
C8, bem como colunas de troca iônica e colunas hidrofílicas HILIC. Se a fase
móvel contiver aditivos ácidos, como ácido trifluoroacético, é recomendável
usar colunas que resistem a pH baixo, como as colunas da série Ultisil® LP.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">10<o:p></o:p></span></span></b></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">P:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Quando a coluna amino (NH2) entra em
contato com amostras acidificadas, isso pode danificar a coluna. Se a forma do
pico mudar depois de usar a coluna por um curto período de tempo, o que devo
fazer para manter a coluna?<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span><b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;">R:</span></b><span style="font-size: 12pt; line-height: 107%;"> Se você usar uma coluna amino (NH2) para
determinar amostras acidificadas, o modo HILIC da coluna amino pode ser usado.
Os ácidos podem protonar grupos funcionais amino ligeiramente carregados
negativamente, resultando em alterações nas propriedades de retenção de alguns
analitos ou diminuição da eficiência da coluna após o uso da coluna por um curto
período de tempo. Sugestão: enxágue a coluna com 5 ~ 10 vezes o volume da
coluna contendo 0,5 ~ 1,0% de NH3 numa solução acetonitrila / água (50/50, depois
disso, lave o excesso de amônia com fase móvel livre de álcali). Um pouco de
amônia, como 0,05%, é recomendado para ser adicionado na fase móvel ao analisar
este tipo de analitos acidificados.</span></span><o:p></o:p></span></p><p class="MsoNormal"><span><span style="color: white; font-size: 12pt; line-height: 107%;"><br /></span></span></p><p class="MsoNormal"><span class="MsoHyperlink"><span style="color: white;">Caso tenha
dúvidas e necessite de maiores informações, entre em contato conosco ou visite
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97065-1719<o:p></o:p></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Site institucional: <span lang="EN-US"><a href="http://www.chromastore.com.br/"><span lang="PT-BR">http://www.chromastore.com.br/</span></a></span><o:p></o:p></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;">Loja online: <span lang="EN-US"><a href="https://loja.chromastore.com.br/"><span lang="PT-BR">https://loja.chromastore.com.br/</span></a></span><span class="MsoHyperlink"><o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span class="MsoHyperlink">Canal no
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<span lang="EN-US" style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 11.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: EN-US; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: "Times New Roman"; mso-bidi-language: AR-SA; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: Calibri; mso-fareast-language: EN-US; mso-fareast-theme-font: minor-latin; mso-hansi-theme-font: minor-latin;">LinkedIn: <a href="https://www.linkedin.com/company/10105768">https://www.linkedin.com/company/10105768</a></span></span></span></p>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-88245185504266522412021-11-29T10:15:00.000-08:002021-11-29T10:15:04.440-08:00<p></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgg8fgsOlMOM9R1mv5d0bZ3sSwDaBA-jWlNuems8aUTZ_WsZBjgDGiS3KRaSENWbEDNz-uojIO8zgLwf5ztILHbCUi1jZTx19Nyluh5UZ0StEWRqMr-Oaap4T-96ppVncXe4kP97a3_Onnc/s417/logos_Welch_Chroma.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img border="0" data-original-height="132" data-original-width="417" height="101" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgg8fgsOlMOM9R1mv5d0bZ3sSwDaBA-jWlNuems8aUTZ_WsZBjgDGiS3KRaSENWbEDNz-uojIO8zgLwf5ztILHbCUi1jZTx19Nyluh5UZ0StEWRqMr-Oaap4T-96ppVncXe4kP97a3_Onnc/s320/logos_Welch_Chroma.png" width="320" /></span></a></div><span style="color: white;"><br /></span><div style="text-align: center;"><span style="color: white;"> Artigos Welch / Chromastore
artigo 26NOV21 Traduzido por Ronaldo Buissa Netto</span></div><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><o:p></o:p></span></p>
<b><div style="text-align: center;"><b><span style="font-family: "Calibri",sans-serif; font-size: 22.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: PT-BR; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: Arial; mso-bidi-language: AR-SA; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: Calibri; mso-fareast-language: EN-US; mso-fareast-theme-font: minor-latin; mso-hansi-theme-font: minor-latin;"><span style="color: white;">Qual é o uso adequado da água na fase líquida ?</span></span></b></div></b><div><span style="color: white; font-family: Calibri, sans-serif;"><span style="font-size: 29.3333px;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgFJkj86xgb8XesVK7Nzw9hfTJrFZ5n8Vwd3eQ7wHcppR5-7s41lvPfz9VouP1mwLKjR_3SUIaEFF0HEMOdLY3SYf4w9ag7nUed3L5ZwSXnMX7Pq355OiUGWg-7kCjHJK4rs2P084WlPyDz/s624/Picture1.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="228" data-original-width="624" height="172" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgFJkj86xgb8XesVK7Nzw9hfTJrFZ5n8Vwd3eQ7wHcppR5-7s41lvPfz9VouP1mwLKjR_3SUIaEFF0HEMOdLY3SYf4w9ag7nUed3L5ZwSXnMX7Pq355OiUGWg-7kCjHJK4rs2P084WlPyDz/w470-h172/Picture1.jpg" width="470" /></a></div></span></span><p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Como todos
sabemos, a água é um dos solventes mais comumente usados em experimentos em
fase líquida, como água purificada, água destilada, água ultrapura etc. Mas
será que realmente sabemos como escolher a água certa?</span> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;">Estrutura
Básica da Água</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Uma molécula
de água (H2O) é formada pelas ligações covalentes de um átomo de oxigênio ligado
a dois átomos de hidrogênio. Estas ligações covalentes entre oxigênio e
hidrogênio tornam a molécula de água polarizada. Quando duas moléculas de água
coexistem, elas se combinam por interação eletrostática com ligações de
hidrogênio para se atrair e manter uma certa distância. Enquanto uma molécula
de água pode se combinar com quatro moléculas de água ao mesmo tempo para
formar uma estrutura cristalina.</span> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 16.0pt; line-height: 107%;">Possíveis
impurezas na água</span></b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Substâncias
inorgânicas solúveis:</span></b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">
sais inorgânicos, gases dissolvidos, metais pesados, componentes de dureza
(cálcio, magnésio, etc);<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Matéria
orgânica solúvel:</span></b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">
lignina, tanino, ácido húmico, endotoxina, enzima de decomposição de RNA,
pesticida, triclorometano, hormônio ambiental, agente ativo interfacial
(tensoativos / surfactantes), solvente orgânico;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Micropartículas:</span></b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"> ferrugem, colóide, suspensões,
partículas sólidas;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Microorganismos:</span></b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"> bactérias, algas.</span> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;">O que há
na água?</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">1. Partículas</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">As
partículas desgastam as bombas, especialmente selos e pistões. Para nossos
injetores, as partículas também os desgastam (entupimentos e riscos nos selos
de rotor, por exemplo). Além disso, as partículas bloquearão colunas e tubos,
resultando em aumento da pressão. As partículas também se comportarão como
outra fase estacionária que pode alterar a composição das amostras.</span><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">2. Compostos
orgânicos</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"> <span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Os compostos orgânicos na água
ultrapura podem afetar a resolução do pico, levando a picos fantasmas. Também
pode alterar a seletividade da fase estacionária e afetar a linha de base
cromatográfica.</span><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">3. Íons</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">A mudança na
concentração de íons afetará o resultado da separação, e alguns íons que
absorvem luz ultravioleta afetarão o pico também. Alguns íons corrosivos até
reduzem a vida útil das bombas de infusão de alta pressão e outros acessórios.</span><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">4. Coloide</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Os coloides
serão adsorvidos irreversivelmente na fase estacionária, afetando a resolução
das colunas.</span><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">5. Microrganismos</span></b><o:p></o:p></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Os micróbios
bloquearão as colunas e seus metabólitos aumentarão os compostos orgânicos, as
partículas e outros poluentes.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"><br /></span></span></p><p class="MsoNormal"></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjM8GhwuKMUihNvpErPbLzhVjWJVhSnW-AWA2Zdi52Pzh4yiYRtsFK3PbdZ4uu6c5U0BxTwvFYSqxcYpPh-DgjyWVrTRv2fH6kVf53cdjBo13ZS2hj26tBKCkkssh8_i_nfWvJUX1_IpRSb/s623/Picture2.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img border="0" data-original-height="540" data-original-width="623" height="200" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjM8GhwuKMUihNvpErPbLzhVjWJVhSnW-AWA2Zdi52Pzh4yiYRtsFK3PbdZ4uu6c5U0BxTwvFYSqxcYpPh-DgjyWVrTRv2fH6kVf53cdjBo13ZS2hj26tBKCkkssh8_i_nfWvJUX1_IpRSb/w231-h200/Picture2.png" width="231" /></span></a></div><p></p><p class="MsoNormal" style="text-align: center;"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Água comumente
utilizada no laboratório</span></span></b></p><p class="MsoNormal" style="text-align: center;"><span style="color: white;"> </span></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">A água comumente
utilizada no laboratório é: água purificada, água deionizada e água ultrapura.<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><o:p><span style="color: white;"> </span></o:p></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Água
purificada:</span></b> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Com o nível
mais baixo de purificação, sua condutividade é geralmente entre 1 - 50μs / cm.
Pode ser obtida por osmose reversa ou destilação única de resina de troca
aniônica fracamente básica. As aplicações típicas incluem limpeza de vidraria, autoclave,
câmaras climáticas e / ou água usada na máquina de limpeza de vidrarias.</span> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Água deionizada:</span></b> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">A
condutividade é geralmente entre 1,0 – 0,1 μs / cm. É obtida por troca iônica
de leito misto com resina de troca aniônica forte. Possui nível relativamente
alto para limpeza de contaminação orgânica e bacteriana, que pode atender a uma
variedade de necessidades, como limpeza, preparação de amostras para padronização
analítica, preparação de reagentes e diluição de amostras.</span> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><b><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;">Água
ultrapura:</span></b> </span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Este nível
de água ultrapura está próximo do limite teórico de pureza em termos de
resistividade, conteúdo orgânico, partículas e conteúdo bacteriano. Normalmente
iniciamos a purificação por troca iônica, membrana de osmose reversa ou
destilação, então obtemos a água ultrapura por purificação por troca iônica.
Geralmente, a resistividade da água ultrapura pode atingir MΩ.18,2 cm, TOC
<10 ppb. Se filtrar 0,1 μm ou partículas menores, o conteúdo bacteriano pode
ser inferior a 1 CFU / ml. Água ultra-pura é adequada para vários tipos de
experimentos de análise de precisão, como cromatografia líquida de alta
performance (HPLC), cromatografia de íons (IC) e espectrometria de massa de
captura de íons (ICP-MS).<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="color: white;"><o:p> </o:p> </span></p>
<p class="MsoNormal"><b><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Coluna
Ghost-Buster II<o:p></o:p></span></span></b></p></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEho27-NeZIAo9E_XwAcZyZXLJc64XWQAa02Eb2hqL0iCpVbPqgDb4Xrj0A64VGtxrHQt5NjMsk6a65GDfjOo3vT_e5vxlX4-syRZwQS5kycC5XO0ql8xWUpc3RhuEC0oOE2rIsinAOdSQ7j/s553/Picture3.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img border="0" data-original-height="553" data-original-width="545" height="180" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEho27-NeZIAo9E_XwAcZyZXLJc64XWQAa02Eb2hqL0iCpVbPqgDb4Xrj0A64VGtxrHQt5NjMsk6a65GDfjOo3vT_e5vxlX4-syRZwQS5kycC5XO0ql8xWUpc3RhuEC0oOE2rIsinAOdSQ7j/w177-h180/Picture3.png" width="177" /></span></a></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"> ● Processo de embalagem otimizado, método de
produção aprimorado, melhor efeito de captura e maior tolerância;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"> ● Desenho do produto ainda mais atualizado,
reduz muito as oscilações de linha de base durante a estabilização do sistema
cromatográfico, minimiza inclinação de linha de base e outras situações;<o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 12.0pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;"> ● Mais compatível com gradientes com alta
proporção de fase aquosa para diminuir o tempo de execução do gradiente total e
linha de base mais estável.<o:p></o:p></span></span></p><p class="MsoNormal"></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEib9hDZbytcw6O6UsisaH5tMTCBkgh9CrlclTYFfHC2cVrStKCKyAQfk_TbOo5Ru2kAfrkjmSLSxE1HiyUl8SBJoS041najGXjNcW-oLdl_FFuWWlA3UbsrTX4tRfgRpnSalqEIbtaR-0P_/s624/Picture4.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: white;"><img border="0" data-original-height="318" data-original-width="624" height="163" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEib9hDZbytcw6O6UsisaH5tMTCBkgh9CrlclTYFfHC2cVrStKCKyAQfk_TbOo5Ru2kAfrkjmSLSxE1HiyUl8SBJoS041najGXjNcW-oLdl_FFuWWlA3UbsrTX4tRfgRpnSalqEIbtaR-0P_/s320/Picture4.png" width="320" /></span></a></div><span style="color: white; font-size: x-small;"><br /><span style="line-height: 107%;"></span></span><p></p><table align="left" border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" class="MsoNormalTable" style="background: white; border-collapse: collapse; margin-left: 4.8pt; margin-right: 4.8pt; mso-table-anchor-horizontal: margin; mso-table-anchor-vertical: paragraph; mso-table-left: center; mso-table-lspace: 7.05pt; mso-table-rspace: 7.05pt; mso-table-top: 18.95pt; mso-yfti-tbllook: 1184; width: 696px;">
<tbody><tr>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 1.5in;" width="144">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><b><span style="font-family: Roboto;">P/N</span></b><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 157.5pt;" width="210">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><b><span style="font-family: Roboto;">Produto</span></b><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 1.5in;" width="144">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><b><span style="font-family: Roboto;">Especificação</span></b><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 148.5pt;" width="198">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><b><span style="font-family: Roboto;">Presssão Máxima</span></b><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
</tr>
<tr>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 1.5in;" width="144">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">06100-31008</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 157.5pt;" width="210">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">Coluna Ghost-Buster </span><span style="font-family: "Times New Roman", serif;">Ⅱ</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 1.5in;" width="144">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">4.0 × 50 mm</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 148.5pt;" width="198">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">400 bar / 5800 psi</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
</tr>
<tr>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 1.5in;" width="144">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">06100-31016</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 157.5pt;" width="210">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">Coluna Ghost-Buster </span><span style="font-family: "Times New Roman", serif;">Ⅱ</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 1.5in;" width="144">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="background-color: white; font-size: x-small;"><span style="font-family: Roboto;">3.0 × 50mm</span><span style="font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
<td style="padding: 9.0pt 6.0pt 9.0pt 6.0pt; width: 148.5pt;" width="198">
<p class="MsoNormal" style="line-height: normal; margin-bottom: 0in; mso-element-anchor-horizontal: margin; mso-element-anchor-vertical: paragraph; mso-element-frame-hspace: 7.05pt; mso-element-left: center; mso-element-top: 18.95pt; mso-element-wrap: around; mso-element: frame; mso-height-rule: exactly;"><span style="font-size: x-small;"><span style="background-color: white; font-family: Roboto;">400 bar / 5800 psi</span><span style="color: white; font-family: Roboto;"><o:p></o:p></span></span></p>
</td>
</tr>
</tbody></table></div><span style="color: white; font-size: x-small;"><br /></span><p class="MsoNormal"><span style="color: white; font-size: x-small;"><br /><span style="line-height: 107%;"><br /></span></span></p><span style="color: white; font-family: Calibri, sans-serif;"><span style="font-size: 29.3333px;"><b><br /></b></span></span><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><span style="color: white;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="color: white;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><p class="MsoNormal" style="text-align: left;"><span class="MsoHyperlink"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><span style="color: white;">Caso
tenha dúvidas e necessite de maiores informações, entre em contato conosco ou
visite nossas mídias sociais:<o:p></o:p></span></span></span></p>
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(11) 2309-0287<o:p></o:p></span></span></span></p>
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(11) 97065-1719<o:p></o:p></span></span></p>
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<p class="MsoNormal" style="text-align: left;"><span style="color: white;"><span class="MsoHyperlink"><span style="font-size: 14pt; line-height: 107%;">Canal
no YouTube: </span></span><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><a href="https://www.youtube.com/channel/UCBva1syjpIx45wiSA3rlBSw?view_as=subscriber">https://www.youtube.com/channel/UCBva1syjpIx45wiSA3rlBSw?view_as=subscriber</a><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal" style="text-align: left;"><span style="color: white;"><span lang="EN-US" style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: EN-US;">Facebook: </span><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><a href="https://www.facebook.com/Chromastore-1477110222589551/"><span lang="EN-US">https://www.facebook.com/Chromastore-1477110222589551/</span></a></span><span lang="EN-US" style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: EN-US;"><o:p></o:p></span></span></p>
<p class="MsoNormal" style="text-align: left;"><span style="color: white;"><span lang="EN-US" style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%; mso-ansi-language: EN-US;">LinkedIn: </span><span style="font-size: 14.0pt; line-height: 107%;"><a href="https://www.linkedin.com/company/10105768"><span lang="EN-US">https://www.linkedin.com/company/10105768</span></a></span><span class="MsoHyperlink"><span lang="EN-US" style="font-size: 14pt; line-height: 107%;"><o:p></o:p></span></span></span></p></div></div><p></p><br /></div>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-43371371541765609372020-10-05T07:22:00.000-07:002020-10-05T07:22:01.256-07:00Guia para escolha de vials<p> </p><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><br /></div></div><p></p><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">Você já parou para pensar o quão importante é a escolha correta dos seus vials para os amostradores automáticos dos seus instrumentos analíticos ?</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">Sabemos que o custo de um vial é insignificante perto dos valores gastos com instrumentação analítica, manutenção, contrato de serviços, etc, mas isso não quer dizer que não temos com o que se preocupar quando falamos deste consumível tão importante para a rotina do seu laboratório.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhi-vEijDLb5PQa5bq6W3kjAk4gyUu1BcGBvwv_3DH_t6vfjcOvWiR_rVnf2FsR59P77sBXJ9HO2Yw9kM6y5lSzEBSY9Y6tYkgnfblJpRIe17tpZb0cgFG3sVVCST5TvJSi4wOF1Z9yJgZy/" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="font-family: verdana;"><img alt="" data-original-height="322" data-original-width="644" height="160" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhi-vEijDLb5PQa5bq6W3kjAk4gyUu1BcGBvwv_3DH_t6vfjcOvWiR_rVnf2FsR59P77sBXJ9HO2Yw9kM6y5lSzEBSY9Y6tYkgnfblJpRIe17tpZb0cgFG3sVVCST5TvJSi4wOF1Z9yJgZy/" width="320" /></span></a></div><span style="font-family: verdana;"><br /><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">O conjunto de consumíveis utilizados para conter sua amostra dentro do amostrador automático é composto por vial, tampa, septo e em alguns casos, insert.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">O que devemos considerar quando escolhemos o vial para seu amostrador automático ?</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Compatibilidade com o amostrador:</b> nem todos os amostradores são iguais. Alguns trabalham com braços robóticos para pegar o seu vial; outros utilizam de carrosel ou bandejas que se movem até a agulha de injeção; em outros modelos, a agulha vai até o sua amostra; alguns amostradores possuem um pegador magnético para mover seu vial até a agulha de injeção. As dimensões dos vials também podem variar de acordo com o fabricante do amostrador. A maioria deles trabalha com vials 12 x 32 mm. Sempre consulte o manual do usuário de seu amostrador para escolher as dimensões de seu vial.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Volume de amostra:</b> a quantidade de amostra disponível é fator primordial na escolha correta do seu vial. Se você tem uma quantidade limitada de amostra disponível, você deverá escolher entre usar um insert dentro do seu vial, usar um micro vial ou até um vial de alta recuperação.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Compatibilidade dos componentes do vial com a amostra:</b> a compatibilidade entre analito e solventes deve ser considerado quando estamos escolhendo o vial e seus acessórios. Por exemplo, se sua amostra é sensível à luz, um vial âmbar deve ser utilizado; um vial de plástico é indicado quando sua amostra interage com o vidro, para cromatografia de íons, AA, ICP MS ou eletroforese capilar. A composição do vidro é outro importante ponto quando falamos de inerticidade química: a USP classifica as vidrarias de laboratório de acordo com sua resistência ao ataque de água. Coeficiente linear de expansão é outro parâmetro a se considerar: quanto menos seu coeficiente, melhor o vidro pode suportar as mudanças de temperatura sem se fraturar. Vials silanizados ou desativados passam por um tratamento químico que tornam sua superfície mais hidrofóbica e inerte, sendo indicados para amostras mais sensíveis como semivoláteis e pesticidas.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Tampas:</b> as tampas podem ser encontradas com rosca, lacrável (crimp) e encaixadas (snap). Tampas rosqueáveis oferecem baixa evaporação, reutilização e menores riscos de ferir as mãos no uso do lacrador / deslacrador. Tampas lacráveis oferecem a melhor vedação mas são descartáveis. Já as tampas encaixadas oferecem praticidade por serem rápidas pra abrir e fechar os vials, mas só são indicadas para amostras não voláteis pois sua vedação não é tão eficiente como as tampas rosqueáveis e lacráveis.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Septos:</b> os septos são fabricados de diferentes materiais e possuem mais de uma camada. É importante verificar a compatibilidade do seu septo com a amostra e os solventes utilizados. Existe a opção de dos septos pré cortados, que mantém o equilíbrio de pressão interna e externa, além de facilitar a penetração pela agulha do amostrador; indicados para amostras não voláteis e para injeções de grande volume proporcionalmente ao volume do vial (1 injeção de 800 uL num vial de 2 mL).</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: center;"><br /></div><br /><b>Inserts:</b> é um acessório muito utilizado quando a quantidade de amostra é um fator limitante para o cliente. O formato e o volume são importantes parâmentros no escolha correta do seu insert. Os inserts de fundo chato possuem maior volume, mas em contrapartida apresentam o maior volume residual. Já os inserts cônicos possuem volumes menores, mas seu formato proporciona um aproveitamento máximo do volume de amostra.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Outros acessórios</b></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Lacrador / Deslacrador manual ou eletrônico:</b> ferramenta obrigatória para selar seus vials utilizando tampas lacráveis. Cuidado com aperto excessivo, que podem causar a quebra do vial e o tensionamento do septo, que pode entortar a agulha do seu amostrador automático.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Vials com insert integrado:</b> podem ser fabricados em vidro ou plástico, são uma solução prática para usuários com volume limitado de amostra, pois não é necessário inserir o insert dentro de cada um dos vials a ser utilizado durante a análise.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Vials de alta recuperação (volume residual mínimo):</b> este tipo de vial apresenta o fundo cônico, facilitando a retirada de pequenos volumes. Indicado aos usuários com volume de amostra limitada.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana; font-size: medium;"><b>Problemas causados pela escolha errada de vials e acessórios:</b></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- picos fantasmas devido a interações do analito e / ou solvente com vial e / ou septo;</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- interferência com os analitos de sua amostra, causado pela interação de seus analitos com o vidro borosilicato de baixa qualidade, com o vial plástico ou com as camadas do septo;</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- perda de analitos ou concentração de analitos devido à evaporação de solventes ou do próprio analito de interesse, causado pela má vedação do conjunto vial + tampa + septo;</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- danos físicos ao seu amostrador, causados por vials / inserts com dimensões erradas ou com deformação na sua construção (paredes finas demais podem causar a quebra, ou fundo irregular são alguns exemplos), septos muito tensionados (risco de entortar a agulha do seu amostrador automático);</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- degradação de sua amostra, devido à má vedação ou interações com vial / insert / septo de má qualidade;</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- baixa reprodutibilidade de suas injeções, causado pela evaporação de amostra e / ou solventes.</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both;"><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><b>Dicas práticas:</b></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- quando comprando vials, não mantenha sua atenção no volume máximo, que pode variar de 1,5 mL à 2 mL dependendo de onde o fabricante mede este limite; se atente às dimensões do vial (altura, diâmetro e largura do pescoço);</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- ND ou N: muitos fabricantes ou revendedores trazem esta informação na descrição do vial (ND9, N8, etc). Isso significa que o diâmetro do pescoço é 9 mm, 8 mm, etc. Esta é sim uma informação crucial no momento da compra. Vials ND8 ou N8 são conhecidos como vials de boca estreita; vials ND9 ou N9 como vials de boca larga; vials ND11 ou N11 são os vials compatíveis com tampas lacráveis ou encaixadas;</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- opte pelos vials de rosca curta (425), pois vedam muito bem mas diminuem o tempo de rosqueamento em até 30%;</span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;"><br /></span></div><div class="separator" style="clear: both; text-align: left;"><span style="font-family: verdana;">- lembre se que quando você utiliza um insert ou um vial com insert integrado, você está mudando a altura do fundo do seu vial, e dependendo do tipo de amostrador que você está utilizando, a agulha deste pode encostar no fundo do vial ou insert, causando irreprodutibilidade entre as injeções e nos piores dos casos até entortar a agulha ou mesmo a quebra do vial no momento da injeção ; vá no software de controle do seu injetor automático e ajuste a altura de coleta da agulha.</span></div></div></div></div></div></div></div></div><div style="margin-left: 1em; margin-right: 1em; text-align: left;"><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgbDc4X5jPFzNsdzuX-9KZjmgKh3VzJHXkhAbks-YzmXKcWpsW1hCqTON5RDCLq8Hly0L0oD9bnVLfHaWfw6d-wd50-GSoFQJruJ3vNPGgVkmVDTS12EVyFnZCXMEvYpTGhf45hP6nru_D5/" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"></a><a href="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgbDc4X5jPFzNsdzuX-9KZjmgKh3VzJHXkhAbks-YzmXKcWpsW1hCqTON5RDCLq8Hly0L0oD9bnVLfHaWfw6d-wd50-GSoFQJruJ3vNPGgVkmVDTS12EVyFnZCXMEvYpTGhf45hP6nru_D5/" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img alt="" data-original-height="67" data-original-width="1861" height="12" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgbDc4X5jPFzNsdzuX-9KZjmgKh3VzJHXkhAbks-YzmXKcWpsW1hCqTON5RDCLq8Hly0L0oD9bnVLfHaWfw6d-wd50-GSoFQJruJ3vNPGgVkmVDTS12EVyFnZCXMEvYpTGhf45hP6nru_D5/" width="320" /></a></div></div><p><br /><br /></p>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-87792810752845226922020-09-08T11:33:00.002-07:002020-09-08T11:33:14.749-07:00HPLC na prática - parte 5: Colunas dedicadas<p> </p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não há nada mais frustrante para um
cromatografista do que chegar no dia seguinte em frente do seu HPLC e perceber
que aquela sêquencia colocada pra rodar no dia anterior foi perdida. </span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não importa se era um teste, 5
lotes de produto final, estabilidade ou uma validação de método, aquele
instante da descoberta é frustrante e a única coisa que queremos saber é o que
causou o problema.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Em geral procuramos por erros
grandes para justificar o problema: uma coluna saturada, uma fase móvel
preparada errada ou um defeito no equipamento.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Mas na maioria das vezes não
encontramos o tal “problema”, e dependendo do nível de compliance da empresa em
que você atua, alguns dias serão perdidos tentando justificar o erro, sem
encontrar o real motivo para o problema.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O que muitos usuários de
cromatografia líquida ainda não perceberam é que em geral, este “problema”
grande que estamos procurando nada mais é do que a somatória de pequenos erros
gerados na nossa rotina de preparação do sistema HPLC para aquela análise.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Nos </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">próximos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">
posts </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">iremos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">
tratar em detalhes quais são os cuidados que os cromatografistas experientes</span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">utilizam em sua rotina para
garantir uma rotina produtiva e confiável.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">Colunas dedicadas:</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">para
alguns segmentos do mercado, falar em coluna dedicada é redundância, mas esta
não é a realidade de todo o mercado de cromatografia.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Laboratórios</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">prestação</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">serviços</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">não</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">fazem</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">sempre</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">mesma</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">análise,</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">mas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">sim</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">que</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">cliente
precisa e quase sempre não é uma única metodologia.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Empresas de médio e pequeno porte
não possuem grandes orçamentos para manter 20 ou 30 colunas para cada um dos
seus produtos, por isso compartilham as colunas entre métodos.</span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Mas por que ter colunas dedicadas
irá melhorar a eficiência da minha rotina cromatográfica ?:</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;"><span style="mso-special-format: bullet;"><span> </span>- <span>a</span></span></span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> durabilidade de uma coluna
dedicada normalmente já é <span> </span>conhecida, pois temos o histórico daquela análise, e
por esta <span> </span>razão já sabemos que uma dada coluna dura 500, 1000 ou 3000 <span> </span>injeções,
e isso utilizado junto com o livro de registro analítico é <span> </span>ferramenta
importante para sabermos quando uma coluna vai falhar numa adequabilidade de
sistema e nos precavermos trocando a coluna antecipadamente;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><br /><!--[endif]--></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;"><span style="mso-special-format: bullet;"><span> </span>- </span></span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">número</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">interferentes</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">e</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">tipo</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">deles</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">também</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">já</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">é</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">conhecido numa coluna dedicada, o que não </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">causa surpresas entre rotinas
diferentes, ou seja, um contaminante do método A pode coeluir com </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">um analito do método B rodado na
mesma coluna, causando perda de tempo e de produtividade;</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><p></p><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;"><span> </span>- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">as colunas dedicadas duram mais
facilitam o cálculo do custo analítico, pois tenho um melhor controle da vida
útil da coluna. Por exemplo: um método A tem uma coluna com vida útil média de
3000 injeções, já a coluna do método B dura por volta de 500 injeções; se cada
análise minha consome 50 injeções (método A e B - hipotético para efeito de
cálculo), numa coluna dedicada eu teria
uma coluna durando 60 análises pro método A e pro método B a coluna dedicada
duraria 10 análises. Como eu teria certeza do custo analítico numa coluna
compartilhada ?</span></div><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"></span></p><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">em</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">colunas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">dedicadas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">tempo</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">gasto</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">com</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">equilíbrio
e limpeza é menor ou pelo menos mais eficiente: se seu método foi bem
desenvolvido, parte desse desenvolvimento focou na limpeza da coluna, baseado
nos tipos de modificadores utilizados, nos diferentes interferentes presentes
naquela matriz, entre outros pontos importantes. Com isso, a limpeza após o uso
da coluna é sempre o mesmo, dando maior previsibilidade com relação ao tempo
gasto com aquela análise, cálculos como hora / máquina, hora / homem, hora /
análise, etc.</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><br /><!--[endif]--></div>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">Dicas práticas:</span></p>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"><span> </span>- c</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">oluna</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">é</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">um</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">consumível,</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">vai</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">gastar</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">e</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">acabar,</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">por</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> <span> </span><span> </span><span> </span><span> </span></span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">isso </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">utilize </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">ferramentas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">pra</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">prever</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">este</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">fim</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">e</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">evitar </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">perda de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">tempo</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">e</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">produtividade;</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- o custo de uma coluna para uma
análise é relativamente baixo, quando comparado ao custo com outros
consumíveis, como por exemplo SPE; não perca tempo tentando rodar uma análise
com uma coluna com pratos teóricos comprometidos, troque por uma nova e previamente
equilibrada e em paralelo tente limpar e / ou regenerar a coluna velha;</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">mantenha registros de sua coluna:
muitos usuários possuem logbook de equipamentos, mas não possuem logbook de
colunas. Um registro básico com inormações como pressão, pratos teóricos,
resolução e outros parâmetros cromatográficos nos ajudam a ter uma idéia
bastante precisa das condições de nossa coluna;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><br /><!--[endif]--></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-align: left; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;"><span style="mso-special-format: bullet;">- </span></span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">sempre</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">mantenha</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">cromatograma</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">das
primeiras injeções como referência: uma simples comparação entre os formatos de
pico da coluna nova e seu estado atual já eliminam a perda de tempo com
tentativas de rodar adequabilidade de sistemas, injeções teste, etc. </span></div><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"></span></div></div>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-79710671760695725942020-08-20T10:31:00.000-07:002020-08-20T10:31:02.522-07:00HPLC na prática - parte 4: Degaseificação<p> </p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não há nada mais frustrante para um
cromatografista do que chegar no dia seguinte em frente do seu HPLC e perceber
que aquela sêquencia colocada pra rodar no dia anterior foi perdida. </span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não importa se era um teste, 5
lotes de produto final, estabilidade ou uma validação de método, aquele
instante da descoberta é frustrante e a única coisa que queremos saber é o que
causou o problema.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Em geral procuramos por erros
grandes para justificar o problema: uma coluna saturada, uma fase móvel
preparada errada ou um defeito no equipamento.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Mas na maioria das vezes não
encontramos o tal “problema”, e dependendo do nível de compliance da empresa em
que você atua, alguns dias serão perdidos tentando justificar o erro, sem
encontrar o real motivo para o problema.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O que muitos usuários de
cromatografia líquida ainda não perceberam é que em geral, este “problema”
grande que estamos procurando nada mais é do que a somatória de pequenos erros
gerados na nossa rotina de preparação do sistema HPLC para aquela análise.</span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Nos </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">próximos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">
p</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">osts </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">iremos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">
tratar em detalhes quais são os cuidados que os cromatografistas experientes</span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">utilizam em sua rotina para
garantir uma rotina produtiva e confiável.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">Degaseificação: </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a
degaseificação é com certeza um dos pontos mais sensíveis quando tratamos de se
manter uma rotina analítica eficiente e produtiva. </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Muitos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">ignoram</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> a </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">importância</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">deste</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">fator</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">nos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">dias</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">atuais</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">, </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">graças</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> a </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">grande</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">eficiência</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> dos </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">degaseificadores</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">em</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">linha</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> que </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">existem</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">hoje</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">nos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">sistemas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">HPLC
/ UHPLC, mas </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">isso</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">não</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">elimina</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> o </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">risco</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> de </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">problemas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> com </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">bolhas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Como</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">funcion</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> um
degaseificador em linha: basicamente no caminho fluídico do seu HPLC há um
pequeno tubo plástico permeável à gás dentro de uma pequena câmara onde é
aplicado vácuo; como este tubo é bastante fino, ele apresenta uma boa área de
contato e por diferença de pressão, o gás dissolvido ou pequenas bolhas são
forçadas a permearem o tubo e saírem da sua fase móvel.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O que acontece quando uma bolha de
ar passa pra dentro do sistema HPLC: há muitas possibilidades quando tentamos
imaginar como a bolha se comporta dentro do sistema HLPLC. Bolhas grandes podem
causar grande oscilação da pressão, o que em alguns sistema mais modernos
causará o interropimento do fluxo; se você tiver sorte, ela pode apenas causar
uma oscilação no fluxo e pressão, oque inevitavelmente causará algum efeito na
cromatografia. Se esta </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">bolha passar no sistema no momento
da injeção, ela pode ocupar um determinado volume dentro do loop </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">amostragem,</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">que</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">causará</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">problemas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">reprodutibilidade.
Enquanto passa pela coluna, a bolha tende </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">ficar</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">em</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">solução</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">, mas
não elimina a possibilidade de alguma interação com a separação cromatográfica.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Mas ao sair da coluna, a pressão do
sistema volta a ficar próxima a pressão ambiente e a bolha reaparece, podendo
causar picos ou distúrbios de linha de base. Micro bolhas irão se apresentar
como um ruído constante de linha de base, facilmente observável para quem já
conhece a cromatografia daquele método / análise específica.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"></span><p></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O oxigênio dissolvido na solução é
mais grave para alguns tipos de detecção, como na fluorescência (supressão ou
atenuação de alguns compostos), detectores de índice de refração ou para os
detectores eletroquímicos em modo redutor.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">Dicas práticas:</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">- faça a degaseificação dos seus solventes para HPLC com vácuo e ultrassom
(método mais efetivo) por 10 min;</span></p><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">no caso</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de
alta sensibilidade à presença de ar ou oxigênio dissolvido, utilize câmaras de
degasser em série para aumentar a eficiência ou na purga com gás Hélio;</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">alterne</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">solvente</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">utilizado</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">nos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">canais</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">do
HPLC, para que ocorra um desgaste proporcional em todos</span></div><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> os canais;</span></p><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">monitore</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">pressão</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">do</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">seu</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">sistema</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">durante
os primeiros minutos de equilíbrio ou corrida, para se</span></div><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> observar a</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">presença</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">bolhas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">ou</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">micro</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">bolhas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">.</span></p>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-60294155948252354032020-08-10T10:32:00.001-07:002020-08-10T10:51:10.897-07:00HPLC na prática - parte 3: a importância do cleanup de amostra<p> </p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não há nada mais frustrante para um
cromatografista do que chegar no dia seguinte em frente do seu HPLC e perceber
que aquela sêquencia colocada pra rodar no dia anterior foi perdida. </span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não importa se era um teste, 5
lotes de produto final, estabilidade ou uma validação de método, aquele
instante da descoberta é frustrante e a única coisa que queremos saber é o que
causou o problema.</span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Em geral procuramos por erros
grandes para justificar o problema: uma coluna saturada, uma fase móvel
preparada errada ou um defeito no equipamento.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Mas na maioria das vezes não
encontramos o tal “problema”, e dependendo do nível de compliance da empresa em
que você atua, alguns dias serão perdidos tentando justificar o erro, sem
encontrar o real motivo para o problema.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O que muitos usuários de
cromatografia líquida ainda não perceberam é que em geral, este “problema”
grande que estamos procurando nada mais é do que a somatória de pequenos erros
gerados na nossa rotina de preparação do sistema HPLC para aquela análise.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Nos </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">próximos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">
posts </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">iremos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">
tratar em detalhes quais são os cuidados que os cromatografistas experientes </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">utilizam em sua rotina para
garantir uma rotina produtiva e confiável.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">A importância </span><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">do </span><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; font-style: italic; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">cleanup</span><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;"> de
amostra: </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">John
Dolan, um dos maiores especialistas em cromatografia líquida do mundo conta que
quando perguntam pra ele como fazer uma coluna durar para sempre a resposta que
ele dá é simples: “nunca faça uma injeção”.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><br /></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">É muito importante entender que o
processo de cleanup de amostra é determinado no desenvolvimento do método. Para
que essa etapa seja bem desenvolvida, o conhecimento da matriz da amostra é
indispensável, e nem sempre isso é feito com maestria. Quanto mais limpa é sua
amostra, maior será a vida útil de sua coluna e mais confiável seu método será.
</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Um problema conhecido de tratamento
de amostra é o uso de filtro de seringa. Muito utilizado para retirar material
particulado da amostra, o filtro é utilizado de maneira errônea, pois não se
leva em consideração o tipo de membrana (Nylon, PTFE, PVDF, PES, CF, etc),
volume de filtração, tamanho de poro, perda de volume de amostra, por exemplo.
Na indústria farmacêutica, por exemplo, filtro de seringa é quase uma regra,
mas qual o peso da cada filtro no custo final da injeção ? Será que não
adicionei algum contaminante na análise por utilizer o filtro errado ? Será que
está ocorrendo alguma retenção seletiva de um compost específico ? Será que o
processo de filtração não deva ser validado para garantir e eficiência e a
robustez desse método ?</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Outras maneiras de tratamento de
amostra devem ser considerados, como o uso de cartuchos de extração em fase
sólida SPE (“limpeza química”) e a
centrifugação.</span></p><p style="direction: ltr; language: pt-BR; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O maior problema com este material
particulado entrando no sistema é o entupimento do frit de coluna. Isso leva ao
rápido e prematuro aumento de pressão e perda de eficiência da coluna, gerando
perdas de tempo enormes, além do aumento do custo da operação com trocas
prematuras de colunas.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"></span><p></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Outro risco é de entupimento do
sistema de injeção do seu HPLC. Os principais componentes que podem entupir são
a agulha, o assento de agulha e os canais da válvula de injeção.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Considere o uso de filtros de linha
no sistema de injeção (normalmente com 0.5 um de malha). Este filtro irá reter
o material particulado que ficaria retido na frit de 2 um da coluna e pode ser
trocado muito mais facilmente que o frit da coluna.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Resumindo:</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><ul style="text-align: left;"><li><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">conheça bem sua matriz para a determinação do cleanup eficiente e com o
melhor custo/benefício;</span></li><li><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">ao</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">determinar a filtração com filtro de seringa, conheça as possibilidades
e valide para um método robusto;</span></li><li><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">pense</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">na</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">utilização</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">filtro</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">linha</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">no</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">sistema</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">injeção,</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">para</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">minimizar problemas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">com</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">entupimentos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">frit</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">colunas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">ou</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">amostradores</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">injeção.</span></li></ul><p></p>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-76253885999071368262020-07-30T10:39:00.000-07:002020-07-30T10:39:27.171-07:00HPLC na prática: Dicas para uma rotina eficiente na cromatografia líquida – parte 2<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não há nada mais frustrante para um cromatografista do que chegar no dia seguinte em frente do seu HPLC e perceber que aquela sêquencia colocada pra rodar no dia anterior foi perdida.</span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não importa se era um teste, 5 lotes de produto final, estabilidade ou uma validação de método, aquele instante da descoberta é frustrante e a única coisa que queremos saber é o que causou o problema.</span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Em geral procuramos por erros grandes para justificar o problema: uma coluna saturada, uma fase móvel preparada errada ou um defeito no equipamento.</span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Mas na maioria das vezes não encontramos o tal “problema”, e dependendo do nível de compliance da empresa em que você atua, alguns dias serão perdidos tentando justificar o erro, sem encontrar o real motivo para o problema.</span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">O que muitos usuários de cromatografia líquida ainda não perceberam é que em geral, este “problema” grande que estamos procurando nada mais é do que a somatória de pequenos erros gerados na nossa rotina de preparação do sistema HPLC para aquela análise.</span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Nos </span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">próximos</span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> posts </span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;">iremos</span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> tratar em detalhes quais são os cuidados que os cromatografistas experientes utilizam em sua rotina para garantir uma rotina produtiva e confiável.</span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">A importância da limpeza do seu
sistema HPLC</span><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">: </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">acompanho
a rotina de grandes laboratórios de cromatografia no Brasil há muitos anos, e a
observação atenta da rotina destes lugares revela algo importante: falta
cuidado e limpeza nos sistema de cromatografia líquida na maioria destes
lugares.</span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Como causa para esta afirmação
temos a rotina extremamente sobrecarregada do uso dos HPLC`s, a falta de
conhecimento sobre a importância desta limpeza e sobre como fazer isso de
maneira eficiente, além de outras possíveis causas.</span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Neste post vamos explicar como
fazer esta limpeza de maneira extremamente eficiente, aumentando a
produtividade e diminuendo o números de reanálises e reinjeções.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Um sistema HPLC sujo pode ser o
causador de inúmeros tipos de sintomas:</span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">aumento da pressão de trabalho
devido à entupimentos parciais</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">em bombas, injetores e detectores;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">ruídos de linha de base e picos não
desejados;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">vazamentos e precipitações;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18.0pt;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">supressão</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">picos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">interesse;</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">- entre outros problemas.</span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">A limpeza de um sistema deve ser
dividida em 3 situações principais:</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">limpeza após uma rotina de análise;</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">limpeza</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">ao</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">final</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">do</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">dia;</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">limpeza para longos períodos de
parad</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">a.</span></p><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><span style="color: red;">Nota importante:</span></span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">neste
post estamos considerando o uso de</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">colunas para fase reversa, a técnica
dominante nos dias atuais</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">quando o assunto é cromatografia líquida. As dicas
aqui não são</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">para limpeza de colunas, mas sim para limpeza de Sistemas HPLC.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Caso sua coluna tenha alguma peculiaridade nos cuidados, siga</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">atentamente antes
de fazer qualquer outro tipo de procedimento.</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p>
<p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Antes de tudo, se sua análise
utiliza tampões, soluções acidificadas</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">ou basificadas, troque esta solução por
água e passe no sistema por</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">pelo menos 15 minutos (fluxo e % de solventes do
método</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">utilizado). No caso de gradientes, corra o gradiente inteiro com a</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">água
substituindo o tampão (15 minutos no mínimo). Em seguida,</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">passe um solvente
forte </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">(geralmente ACN ou MeOH) por mais 15</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">minutos pelo menos (no caso de
gradientes corra pelo menos um</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">gradiente inteiro).</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Caso você tenha o uso de
equipamentos dedicados (um sistema</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">HPLC que roda a mesma análise diariamente) e
quer manter o</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">sistema “pronto”, não desligue seu HPLC durante </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">noite</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">e</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">mantenha
o fluxo de fase móvel em 0,2 mL </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">/ </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">min, evitando assim</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">precipitação e
crescimento microbiano. Se seu sistema fica parado</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">durante a noite, mantenha
sempre os canais purgados com solvente</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">forte (MeOH ou ACN). Caso seu sistema
for ficar parado por mais de</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">5 dias sem uso, é indicado manter o mesmo em
solução MeOH: H2O</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">(50:50).</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><span style="color: red;">Dicas práticas:</span></span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">se seu laboratório utiliza muito
tampão (principalmente tampões</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">com concentrações acima de 50 mM), é
extremamente indicado o</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">uso de dispositivo de lavagem de selos de bomba, para
aumentar a</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">durabilidade dos selos de pistão (H2O:IPA 90:10);</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">mantenha</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">as</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">soluções
de uso sempres frescas, trocando-as</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">regularmente;</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">se</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">seu</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">sistema</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">apresenta</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">sais</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">nas</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">conexões</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">(vazamentos),</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">limpe-os</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">para</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">evitar</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">contaminação de suas injeções;</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">atenção</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">com</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">soluções</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">lavagem</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">agulha,</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">pois
esta deve ser</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">preferencialmente o seu diluente (atenção com sais e reagentes</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">agressivos utilizados no seu diluente) ou solvente mais forte, ou a</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">limpeza da
agulha será ineficiente;</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">frascos</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">de</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">solventes</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">bem</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">tampados
evitam entupimentos dos</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">filtros pescadores e a evaporação de solventes tóxicos
pro</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">ambiente;</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">- </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">sempre verifique nível de descarte
para evitar derramamentos em</span></p><p style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt; text-indent: -0.31in;">seu laboratório e / ou bancadas. </span></p></div></div><div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div><div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;"><br /></div>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-12138541658766127812020-07-23T05:28:00.000-07:002020-07-23T05:28:08.622-07:00HPLC na prática: Dicas para uma rotina eficiente na cromatografia líquida – parte 1<br />
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">Não há nada mais frustrante para um
cromatografista do que chegar no dia seguinte em frente do seu HPLC e perceber
que aquela sêquencia colocada pra rodar no dia anterior foi perdida. </span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">Não importa se era um teste, 5 lotes de
produto final, estabilidade ou uma validação de método, aquele instante da
descoberta é frustrante e a única coisa que queremos saber é o que causou o
problema.</span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">Em geral procuramos por erros grandes
para justificar o problema: uma coluna saturada, uma fase móvel preparada
errada ou um defeito no equipamento.</span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">Mas na maioria das vezes não encontramos
o tal “problema”, e dependendo do nível de compliance da empresa em que você atua,
alguns dias serão perdidos tentando justificar o erro, sem encontrar o real
motivo para o problema.</span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">O que muitos usuários de cromatografia
líquida ainda não perceberam é que em geral, este “problema” grande que estamos
procurando nada mais é do que a somatória de pequenos erros gerados na nossa
rotina de preparação do sistema HPLC para aquela análise.</span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">Nos </span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">próximos</span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"> posts </span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;">iremos</span><span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"> tratar em detalhes quais são os cuidados
que os cromatografistas experientes utilizam em sua rotina para garantir uma
rotina produtiva e confiável.</span></div>
<div style="direction: ltr; language: en-US; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; mso-line-break-override: none; punctuation-wrap: hanging; text-align: left; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: black; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-color-index: 1; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: black; mso-style-textfill-fill-themecolor: text1; mso-style-textfill-type: solid;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;">Qualidade dos solvents / reagentes: </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">a
pureza dos solventes e reagentes utilizados em análises por HPLC / UHPLC é de
extrema importância. Reagentes e solvents grau HPLC são mais caros, mas a
diferença no grau de pureza quando comparado aos de grau P.A. é importante para
o resultado final de sua análise. </span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div>
<br />
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Impurezas orgânicas mais apolares tendem
a ficar retidas na coluna de fase reversa e dependendo da composição de fase
móvel, isso pode se acumular na cabeça da coluna cromatográfica, causando
aumento da pressão de trabalho. Se esse contaminante conseguir se deslocar na
coluna durante uma análise isocrática, um ruído de linha da base pode ser
observado. Se este mesmo tipo de contaminante estiver presente numa análise por
gradiente, teremos o aparecimento de picos fantasmas, pois no início do
gradiente a força do solvente é menor e o contaminante ficará retido na cabeça
da coluna; mas com o aumento da força de solvente durante a separação por
gradiente</span><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;"> </span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">o
contaminante sairá possivelmente na forma de um pico.</span><span style="color: red; font-family: Calibri; font-size: 18.0pt; language: en-US; mso-ascii-font-family: Calibri; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-family: +mn-cs; mso-bidi-theme-font: minor-bidi; mso-fareast-font-family: +mn-ea; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-font-kerning: 12.0pt; mso-style-textfill-fill-alpha: 100.0%; mso-style-textfill-fill-color: red; mso-style-textfill-type: solid;"> </span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Impurezas metálicas podem complexar
dentro da coluna e alterar de forma decisiva a interação entre suas moléculas e
a fase estacionária.</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">A qualidade da água é outro ponto
fundamental nesta equação, pois a água de má qualidade irá trazer inúmeras
impurezas para sua análise, por isso a água grau HPLC é mandatória. Por outro
lado, a água grau HPLC fica suscetível ao crescimento microbiano, outra fonte
de contaminação.</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Não se esqueça de considerar também o
grau de pureza dos sais utilizados no tampão, pois estes são fontes
consideráveis de impurezas da análise cromatográfica.</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;"><br /></span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">Outras considerações importantes:</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-size: 18.0pt;">-</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">mantenha frascos de fase móvel fechados
para evitar a contaminação;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-size: 18.0pt;">-</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">utilize frascos âmbar para água e
tampões, para minimizer o crescimento microbiano;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-size: 18.0pt;">-</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">água grau HPLC e tampões devem ser
trocados com frequência, devido ao crescimento microbiano;</span></div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0in; margin-top: 0pt; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
</div>
<div style="direction: ltr; margin-bottom: 0pt; margin-left: 0.31in; margin-top: 0pt; text-indent: -0.31in; unicode-bidi: embed; word-break: normal;">
<span style="font-size: 18.0pt;">-</span><span style="font-family: Calibri; font-size: 18pt;">evite o uso de frascos plásticos para
fase móvel, pois aditivos adicionados ao plástico podem contaminar sua fase
móvel.</span></div>
<br />Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-56435906827614109942010-09-01T09:26:00.000-07:002010-09-01T09:31:13.320-07:00Os 10 maiores mitos sobre colunas de HPLC - Parte 3Mito 5:<br /><br />“Quanto maior a carga de carbono melhor a coluna de fase reversa”<br /><br />Falso. Parece haver equívocos sobre o papel do comprimento da cadeia, a carga de carbono, cobertura de superfície, e assim por diante, quando se trata das populares fases ligadas de alquilas. Em geral, no mecanismo verdadeiro de fase reversa, onde a retenção é baseada na hidrofobicidade relativa das moléculas do analito, ou seja, a retenção é baseada na carga de carbono, quanto maior a carga de carbono, maior a retenção. A carga de carbono pode ser proporcional ao comprimento da cadeia, mas isso não é necessariamente uma regra. Uma sílica gel típica tem cerca de 8,0 umol /m2 de silanóis reativos que são utilizados para ligações com reagentes organosilanos. Se, por exemplo, para uma dada cobertura de superfície de uma fase ligada com camada simples em umol/m2, quanto maior o comprimento da cadeia, mais carbonos estariam presentes e, portanto, a retenção será proporcional ao comprimento da cadeia. Porém, se uma fase ligada de cadeia mais curta (digamos C8) tiver uma maior cobertura de superfície, teremos mais carbono na superfície e consequentemente maior retenção que uma coluna C18. Além disso, alguns fabricantes utilizam fases ligadas poliméricas (utilizando di e triclororganosilanos), que aumentam a cobertura da fase ligada; ou seja, uma coluna polimérica de cadeia mais curta pode apresentar uma cobertura muito maior que uma fase monomérica de cadeia mais longa. Algumas vezes estas fases poliméricas apresentam uma camada mais espessa da fase ligada, o que resulta numa fase estacionária com uma transferência de massa pior que uma fase ligada monomérica. Colunas de fase reversa altamente carregadas de carbono estão mais propensas ao colapso de fase. Para colunas como essa, quando a quantidade de modificador orgânico cai abaixo de 10% em meio aquoso, estas colunas de fases hidrofóbicas preferir uma auto-associação (colapso de fase) ao invés de estar em uma solução aquosa polar. Assim, nesnta situação, ter uma elevada carga de carbono poderá ser prejudicial para o sucesso da cromatografia de fase reversa e sua reprodutibilidade de tempo de retenção.<br /><br />Mito 6:<br /><br />“Sempre se consegue maior eficiência utilizando uma coluna empacotada com partículas menores”<br /><br />Falso. Embora que para uma coluna bem empacotada a eficiência aumente quando o diâmetro médio de partícula diminui, se os efeitos extra-coluna contribuirem de forma elevada para o aumento do alargamento de banda, o desempenho superior desta coluna não será atingido. Efeitos extra-coluna são todos os volumes adicionais que acontecem no sistema cromatográfico, excluindo-se o próprio empacotamento da coluna. Estes volumes adicionais incluem:<br /><br />- volume de injeção incluindo o tamanho do loop de injeção como também o volume adicional dentro da válvula(s) de injeção.<br />- volume do tubo da saída do injetor até a entrada da coluna.<br />- volume da coluna de guarda (se presente).<br />- volume do filtro de linha (se presente).<br />- volume interno de anilhas e parafusos de entrada e saída, incluindo porosidade do frit e canais preferenciais de fluxo.<br />- volume da tubulação entre a saída da coluna e a entrada do detector.<br />- volume da tubulação dentro do detector e antes da célula de fluxo.<br />- volume da célula de fluxo.<br /><br /> Então, você pode minimizar o volume de injeção e manter tubulações curtas e de diâmetros corretos para minimizar esses efeitos extra-colunas, mas se houver uma tubulação de 0,20 polegadas conectando a saída da coluna ao detector, então a largura de banda deve ser grande o suficiente para afetar a eficiência da separação. Por isso, tenha certeza que os efeitos extra-coluna estão minimizados para que você possa conseguir a eficiência esperada de colunas com partículas menores que 2 um ou colunas de menores calibres (1,0 mm de diâmetro interno por exemplo).Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com45tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-1142171805782550362009-05-27T05:39:00.000-07:002009-10-16T10:50:38.326-07:00Colunas de guarda realmente funcionam ??Pergunta: Colunas de guarda realmente funcionam ou são apenas chamariz dos fabricantes de coluna ??<br /><br />Resposta (John Dolan): Colunas de guarda realmente protegem as colunas analíticas de HPLC. Elas atuam de 2 formas principais. Primeiro, elas normalmente tem a mesma porosidade de frit como a coluna analitica, por exemplo, frit de 2 um e partículas de 5 um no material empacotado. Isto faz com que a coluna de guarda retenha toda e qualquer partícula que entupiria a cabeça da coluna analítica. As colunas de guarda também apresentam a mesma composição química das colunas analíticas, então qualquer coisa que possa se ligar irreversivelmente a coluna analítica ficará retida na coluna de guarda.<br />O truque, é claro, é substituir ou lavar a coluna de guarda antes que ela perca sua função e comece a "sangrar" para dentro da sua coluna analitica. Muitos usuários determinam a vida útil das colunas de guarda pela sua experiência e substituem estas depois de um certo n° de injeções ou determinado n° de dias.<br />Eu não sou um grande defensor das colunas de guarda. Sim, elas protegem a coluna analítica, mas é muito raro se conseguir um alto n° de pratos teóricos num sistema com coluna de guarda se compararmos com um sistema sem, e elas são bastante caras. A coluna de guarda ajudará a reduzir ou eliminar os resíduos de amostras sujas, mas as colunas de guarda são caras. O que realmente eu não gosto é a relação custo/benefício. Mas é difícil de argumentar em relação ao aumento da vida útil da coluna analítica. A questão é se este ganho é suficiente para justificar este incômodo para você.<br />Se você optar por usar coluna de guarda, adquira do mesmo fabricante da sua coluna analítica, e manter o mesmo tipo de material empacotado (C18, por exemplo). Você não quer que diferentes interações químicas ocorram na coluna de guarda e na sua coluna analítica - isto pode comprometer sua separação.Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com8tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-3017034434143530902009-05-13T06:41:00.000-07:002009-05-13T07:00:39.938-07:00Eu preciso mesmo usar Trietilamina ?Pergunta: Meu supervisor insiste que eu devo adicionar 20 mM de Trietilamina (TEA) em todas as minhas fase móveis para reduzir o efeito cauda., mas eu não vejo o uso de TEA na maioria dos métodos. Ele conhece algum segredo que os outros deveriam saber ?<br /><br />Resposta (John Dolan): Pelo contrário, ele provavelmente está recomendando o uso de TEA porque ele trabalhou há muitos anos atrás. A função primária da TEA em métodos HPLC de fase reversa é suprimir as interações entre grupos silanóis fortemente ionizados (-Si-OH) presentes na superfície da sílica com analitos alcalinos. Os silanóis ionizados (-Si-O-) serão encharcados pelo excesso de TEA na fase móvel e não vão interagir com os compostos alcalinos e consequentemente não causarão o efeito cauda. O uso de TEA era muito comum nas colunas antigas com sílica de baixa pureza. Estas eram chamadas de Tipo-A ou sílica acidificada. Algumas marcas que podem ser familiares à você são Microbondapak, Nucleosil e Hypersil. Estas marcas de colunas eram as mais utilizadas até o meio da década de 90, mas as colunas de hoje são fabricadas com uma sílica de alta pureza (Tipo-B) que são muito menos acidificadas. Exemplos desta nova tecnologia são as colunas Symmetry, Zorbax StableBond, ACE, e Luna. TEA não é necessário para estas colunas. Eu sou um grande fiel do princípio KISS (Keep It Simple, Stupid) - quanto mais coisas você coloca na fase móvel, mais problemas está querendo arrumar.<br />Então, respondendo sua pergunta, o que seu chefe recomenda faz muito sentido para as colunas Tipo-A, mas não é mais necessário para as colunas com sílica de alta pureza utilizadas hoje em dia.Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-5901251371398304652009-05-06T05:38:00.000-07:002009-05-06T06:05:43.387-07:00Volume de Pico ?? O que é ? Como calcular ??Pergunta: O que é volume de pico e como faço para calculá-lo ?<br /><br />Resposta (John Dolan): O volume de pico é simplesmente o volume de fase móvel na qual o pico elui de uma coluna de HPLC. A maneira mais simples para medir o volume de pico é medir a largura de pico, seja no monitor do computador ou em papel impresso, calculando a base do pico em centímetros. Trace uma linha reta através da base do pico, unindo a linha de base antes e depois do pico. Em seguida, trace as tangentes dos lados dos picos até a intersecção das tangentes com a linha de base traçada. A distância entre esses dois pontos de intersecção é a largura de pico, que pode ser medido em unidades de tempo. Converta o tempo para volume multiplicando a largura de pico pela taxa de fluxo. Então se a amplitude do pico é 0,345 min e o fluxo é de 2 mL/min, o volume de pico é (2 x 0,345) = 0,690 mL. Claro que seu sistema de dados já fornece a largura de pico, você pode simplesmente multiplicar este número pelo fluxo e pular a construção das tangentes.Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-46099688569505208702009-04-29T05:15:00.000-07:002009-04-29T05:54:48.278-07:00Dicas - Removendo TampõesPergunta: Qual é a forma correta de lavar uma coluna de fase reversa após usar uma fase móvel composta por tampão: orgânico ? Por exemplo, se eu tenho uma fase móvel (60:40) metanol: tampão (25 <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_0">mM</span> de fosfato), qual é a melhor maneira de lavar a coluna após a utilização?<br /><br />John <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_1">Dolan</span> responde: Existem várias maneiras para se lavar uma coluna. A preocupação quando estamos lavando uma coluna utilizada com tampão é que nós não queremos precipitar o sal dentro coluna. Portanto, a maneira mais segura de se livrar do tampão é substituí-lo por água e utilizar a mesma composição de fase móvel para a primeira lavagem. Para o caso acima, devemos começar a lavagem com (60:40) metanol:água durante alguns minutos (pelo menos 5 <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_2">min</span> num fluxo de 1-2 <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_3">mL</span>/<span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_4">min</span>) e, em seguida, ir até 100% de metanol (<span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_5">MeOH</span>), para retirar materiais fortemente retidos na coluna. Com <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_6">MeOH</span>, uma mudança de sua fase móvel <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_7">tamponada</span> <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_8">direto</span> para <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_9">MeOH</span> provavelmente não é uma preocupação muito grande, porque tampões são bastante solúveis em <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_10">MeOH</span>. Mas se você utilizar <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_11">acetonitrila</span> (<span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_12">ACN</span>), onde os tampões apresentam solubilidade muito mais baixa, é possível precipitar o tampão, e esta é uma má notícia.<br /><br />Outra maneira de lavar a coluna é apenas utilizar 100% de água por alguns minutos antes de se mudar para 100% orgânico. Alguns usuários rejeitam esta <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_13">ideia</span>, em virtude do <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_14">fenômeno</span> conhecido como "colapso de coluna", onde em presença de 100% de água, esta é forçada a sair dos poros da coluna. Isto pode acontecer, mas o meu palpite é que a maior parte do tampão é retirado antes que isso aconteça. Se após a lavagem com 100% de água você lavar a coluna com um solvente forte (100% orgânica), a coluna será reequilibrada, e não deve haver problema. Esta maneira é simples, e pode ser mais fácil de automatizar num <span class="blsp-spelling-error" id="SPELLING_ERROR_15">HPLC</span>.<br /><br />Revisando, a chave para lavagem de uma coluna após o uso de tampão é remover o tampão, de modo que não haja risco de precipitação e, em seguida, lavar com 100% orgânico para remover o material fortemente retido. Se você tiver a infeliz experiência de precipitar o tampão, o melhor é jogar fora a coluna - retirar o tampão precipitado dos poros da coluna é quase impossível.Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com3tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-74432783912593387082009-02-02T04:39:00.000-08:002009-02-02T04:45:49.843-08:00Análise de aminoácidos - Visão Geral - Parte 1Análise de aminoácidos – Visão Geral<br /><br />As análises de aminoácidos envolvem as metodologias utilizadas para determinar a composição ou conteúdo de aminoácidos de proteínas, peptídeos, e outras preparações farmacêuticas. A análise de aminoácidos é muito utilizada em laboratórios de análises clínicas, bioquímicas e indústria de processamento de alimentos. Ela tem sido estudada durante os últimos 30 anos, diversos métodos foram desenvolvidos e tem sido utilizados, cada qual com características próprias, vantagens e desvantagens que se aplicam a cada grupo de interesses específicos. Proteínas e Peptídeos são macromoléculas formadas por aminoácios covalentemente ligados e organizados como um polímero linear. A sequência de aminoácidos nas proteínas ou peptídeos determina as propriedades da molécula. As proteínas são consideradas moléculas grandes, enquanto os peptídeos são menores e contituídos por poucos aminoácidos. As análises de aminoácidos podem ser utilizadas para quantificar proteínas e peptídeos, para identificar proteínas e peptídeos baseado em sua composição de aminoácidos, para análise estrutural de proteínas e peptídeos, para avaliar estratégias de fragmentação para mapeamento de peptídeos, e para identificar aminoácidos atípicos que podem estar presentes numa proteína ou peptídeo. É necessário hidrolisar uma proteína/peptídeo antes de realizar a análise de aminoácidos. Após a hidrólise, os procedimentos da análise de aminoácidos podem ser os mesmos utilizados para aminoácidos livres em outras preparações farmacêuticas. Os aminoácidos constituintes da amostra são tipicamente derivatizados para a análise. O objetivo da derivatização é aumentar a sensibilidade de detecção e a seletividade da separação. Como o número de aminoácidos de interesse é grande e possuem estruturas químicas muito semelhantes, é necessário a utilização de gradiente de fase móvel (normalmente composta por tampão fosfato e acetonitrila).<br />Um parâmetro limitante que permanece no desenvolvimento da análise de aminoácidos é a confiança na preparação dos hidrolisados protéicos para o método cromatográfico, principalmente quanto à eliminação dos reagentes da hidrólise. A neutralização ou evaporação dos agentes hidrolíticos é importante fator de discussão. O alto teor de sal resultante da neutralização, levado para a coluna de troca iônica, produz alargamento dos picos e não pode ser aplicado a todas as resinas, enquanto que a evaporação até a secagem pode acarretar perdas na recuperação dos aminoácidos durante esse procedimento. O método mais comumente empregado para a eliminação dos reagentes da hidrólise é o da utilização de evaporadores rotativos sob vácuo. Entretanto, para grandes quantidades de amostras torna-se um ponto crítico, pela morosidade e necessidade de acompanhamento contínuo, transformando-se em condição de estrangulamento e demora na análise.<br />Para diminuir o tempo na evaporação de amostras foram propostos procedimentos utilizando sistemas de evaporação para várias amostras simultâneas. Um tratamento alternativo, utilizado em muitos laboratórios, baseia-se na remoção dos reagentes em dessecadores ou câmaras a vácuo em presença de pastilhas de hidróxido de sódio e/ou pentóxido de fósforo.Os métodos utilizados para análise de aminoácidos são usualmente baseados na técnica de separação cromatográfica de aminoácidos presentes na amostra. As técnicas atuais de análise levam vantagem devido aos excelentes níveis de automatização dos equipamentos de HPLC. A análise de aminoácidos necessita normalmente de HPLC’s capazes de gerar gradientes de fase móvel para separar os aminoácidos na coluna cromatográfica. O instrumento deve ter sistema de derivatização póscoluna, ao menos se a amostra for analisada utilizando derivatização précoluna. O detector comumente utilizado é um UV-Vis ou Fluorescência dependendo do método de derivatização utilizado. Um dispositivo de registro faz-se necessário, como por exemplo um registrador ou software para transformar o sinal do detector e para quantificação. É recomendado também dedicar o equipamento somente para análise de aminoácidos.<br /><br />Fonte: Farmacopéia Japonesa, artigos internacionais e nacionais.Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com47tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-47877372568191783892008-12-19T02:18:00.000-08:002008-12-19T03:44:07.505-08:00Somente 3 coisas - Parte 3Lavagem<br /><br />A terceira prática fundamental para a operação de HPLC's com confiabilidade é mantê-lo limpo. Se você seguir o caminho através do fluxo do sistema, você notará várias áreas que podem se beneficiar de regular lavagem. Primeiro, os reservatórios de fase móvel devem ser lavados ou trocados com cada novo lote de solvente ou preparação de fase móvel. Um frasco sujo pode contaminar uma fase móvel ou solvente puro. Eu não gosto de usar tampões por mais tempo do que uma semana e solventes orgânicos por mais de um mês sem lavagem do sistema. De preferência, evite o procedimento de encher ou completar o mesmo frasco de solvente ou fase móvel, mas sim crie o hábito de trocar esse frasco toda vez que uma nova fase é preparada ou um frasco de solvente esvaziou. Na sequência vem a bomba. Eu não gosto de desligar uma bomba por mais de alguns minutos se ela contém um tampão não volátil, como o fosfato. Quando evaporar o solvente, como por exemplo ao redor do selo do pistão, material sólido se precipitará e poderá riscar os selos. Este é um dos principais motivos de desgaste prematuro de selos. Se fases móveis tamponadas são deixados no sistema por longos períodos, especialmente se for utilizada acetonitrila, eles podem formar precipitados, que podem causar desgaste de selos e travamento de check-valves. Então, lave a bomba com fase móvel não tamponada antes de desligá-la por períodos prolongados. O injetor automático também deve ser limpo com regularidade. Eu nunca vi um injetor automático que não apresentou vazamentos ou entupimentos. O solvente de lavagem do injetor automático deve ser tratado da mesma forma que a fase móvel, em termos de validade e regular lavagem ou a substituição do reservatório. Contaminantes se acumulam na coluna ao longo do tempo, muitas vezes sendo eluídos e gerando ruído em futuros cromatogramas. Este problema pode ser minimizado com a lavagem da coluna com o solvente forte da fase móvel (por exemplo, metanol ou acetonitrila), no final de cada lote de amostras ou quando a coluna é removida do sistema. Na minha experiência, é mais fácil lavarmos o sistema como indicado acima do que danificar o detector. Por esta razão, cuidar da coluna cromatográfica e manter bons procedimentos de lavagem do sistema evitam problemas de contaminação e entupimentos em células de fluxo dos detectores. Para detectores que trabalham com fase móvel no estado líquido, como os UV's e Fluorescência, somente se houver problemas específicos no detector, como bolhas, sujeira ou entupimento, siga os procedimentos indicados no manual do detector ou chame um especialista. Detectores evaporativos, como os detectores de espalhamento de luz ou detectores de massa a história é diferente. Estes detectores eventualmente criar uma película de contaminantes não volátil e requerem limpeza regularmente.<br /><br />Resumo: então aí está - desgaseificar, filtrar e lavar. Agora que você recebeu todos os conhecimentos básicos necessários sobre manutenção preventiva. Evidentemente, não é tão simples, mas estas três práticas vão trazer maior confiabilidade no uso e nos resultados de cromatografia do seu laboratório. Boa sorte!Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com88tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-90959228126012921072008-12-02T09:39:00.000-08:002009-10-16T11:04:28.330-07:00Os 10 maiores mitos sobre colunas de HPLC - Parte 2Mito 3:<br /><br /><br /><br />"Coluna de Guarda não afeta a separação"<br /><br /><br />Falso. Primeiro de tudo, utilizar coluna de guarda é uma boa idéia. No entanto, a escolha errada do tipo de coluna de guarda pode ter um grande efeito sobre a separação cromatográfica. Lembre-se que o objetivo de uma coluna de guarda é proteger a coluna analítica de partículas fortemente incrustantes dos componentes da amostra, e outros materiais particulados indesejáveis. A coluna de guarda é muito mais barata do que a coluna analítica, podendo ser substituída com mais freqüência. Idealmente, a coluna de guarda escolhida deve ter exatamente o mesmo recheio utilizado na fase estacionária (coluna analítica). Se a fase estacionária possui maior capacidade de retenção (por exemplo, tem uma maior carga de carbono), então a coluna de guarda pode afetar a separação de um modo prejudicial, causando variação no tempo de retenção ou mesmo diferenças de seletividade. Se a fase estacionária possuir menor capacidade de retenção, a coluna de guarda pode ou não causar problemas, dependendo diretamente do tipo de fase móvel. Para que a coluna de guarda tenha o mínimo de impacto sobre o desempenho da separação, ela deve ser adequadamente inserida no sistema cromatográfico. Obviamente, a coluna de guarda é colocada entre o injetor e a coluna analítica, mas se adicionarmos muita tubulação (seja muito longa ou diâmetro interno maior), alargamento de banda pode ocorrer e afetar a separação entre os picos. Atualmente existem modelos de colunas que integram ou facilitam a colocação de colunas de guarda, evitando o problema citado acima. Essas colunas possuem um tipo de cartucho ou suporte onde a coluna de guarda é adicionada ao sistema com a adição mínima de tubulação, o que torna esse sistema ideal. Seja qual for a configuração utilizada, a coluna de guarda deve ser colocada ou retirada do sistema sem afetar o funcionamento do HPLC. Teoricamente, a coluna de guarda é um acréscimo de fase estacionária no sistema, o que aumentaria os pratos teóricos e consequentemente a resolução cromatográfica. No entanto, por causa de alguns dos fatores discutidos anteriormente, muitas vezes, a adição de uma coluna de guarda só mantém a separação, na melhor das hipóteses, e por vezes deprecia a partir dele, na pior das hipóteses. A vantagem da coluna de guarda está no aumento de vida útil da coluna analítica e não necessariamente aumentar a eficiência global do sistema cromatográfico.<br /><br /><br /><br /><br /><br />Mito 4:<br /><br /><br /><br />"Altas temperaturas sempre levam a melhor separações"<br /><br /><br />Falso. Como a temperatura aumenta, a viscosidade da fase móvel diminui, portanto, a taxa de transferência de massa do soluto deve aumentar, assim, oferecendo uma melhor eficiência cromatográfica. Verdade, mas além do termo eficiência da coluna , temperatura também pode afetar o fator de retenção e a selectividade. O impacto sobre estes termos podem resultar em melhor resolução (que é isso que estamos preocupados na cromatografia) ou diminuí-la. A retenção geralmente diminui à medida que a temperatura aumenta porque, sendo um parâmetro termodinâmico, o analito prefere ficar na fase móvel e consequentemente é eluído mais cedo dentro da coluna. No entanto, diferentes espécies químicas podem possuir diferentes graus de alteração na sua retenção com a variação da temperatura. Além disso, altas temperaturas podem causar uma baixa seletividade e picos podem ser eluídos perto ou sobre o T0 (volume morto), o que pode dificultar a quantificação destes picos. Tomemos como exemplo a figura 1. Esta série de cromatogramas mostra a separação de sete analgésicos com variação da temperatura de coluna de 20 à 90 ° C.<br /><br /><br /><br /><img style="TEXT-ALIGN: center; MARGIN: 0px auto 10px; WIDTH: 161px; DISPLAY: block; HEIGHT: 151px; CURSOR: hand" id="BLOGGER_PHOTO_ID_5275525553709914930" border="0" alt="" src="https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjPdTvw4qspUgCsGywqfmCmW74yjLZucNGsBv63c3pWAbw2BqwzAmV9BL88-ZUYmvW7KQ2rD3BuY26Etwk9SK0T3cfSGQFOcRwhnebY5k58YtUCjCIojzNrvsNcPlqeVIhAgtKT95qUUNCV/s320/imagem.bmp" /><br /><br />Pode-se notar várias diferenças entre os cromatogramas. Em primeiro lugar, a retenção de todos os picos é diminuída com temperaturas mais elevadas e os picos que se tornam mais estreito indicam o aumento da eficiência. Segundo, um dos analgésicos, o ácido salicílico, sofre maior variação do tempo de retenção com a temperatura do que os picos 5 e 6. De fato, a ordem dos picos é invertida após a mudança de temperatura de 20 para 40 ° C. Na injeção com temperatura de 30 ° C, o ácido salicílico e o pico de número 6, fenacetina, são coeluídos. Portanto, neste exemplo, temperaturas superiores a 40 ° C resultam em um tempo mais curto de corrida e ainda uma alteração na ordem dos picos se comparado com injeções com temperatura mais baixas. Além disso, uma vantagem em operar com temperaturas mais elevadas é a diminuição da pressão de trabalho da coluna, que permite o uso de fluxos mais altos ou partículas menores. Outro parâmetro experimental que pode causar problemas de performance da coluna é a grande diferença de temperatura entre coluna e fase móvel. Por exemplo, se a coluna é aquecida a 60 ° C e o solvente esteja à temperatura ambiente, esta variação (delta) de temperatura pode causar distorções de picos devido ao choque térmico sofrido parte inicial da coluna. É recomendado que se pré-aqueça a fase móvel quando se utilizar temperaturas muito elevadas na coluna.<br /><br /><br /><br />fonte: <a href="http://chromatographyonline.findpharma.com/">http://chromatographyonline.findpharma.com/</a>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com2tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-15390377791630177972008-11-17T06:02:00.000-08:002008-11-17T07:49:01.922-08:00Somente 3 coisas - Parte 2Filtração<br /><br />A menos que sejam tomadas precauções especiais, todas as partículas que entram no sistema HPLC acabam terminando do frit da coluna, eventualmente entupindo a coluna, aumentando a pressão do sistema, e distorcendo picos no cromatograma. Todos os esforços feitos para reduzir a quantidade de partículas inseridas no sistema serão recompensados com o aumento da confiabilidade durante a realização de análises. Existem três grandes fontes de partículas em HPLC: a fase móvel, a amostra e o desgaste dos componentes internos do equipamento.<br />Se a fase móvel é composta apenas por solventes grau HPLC, não é necessário para filtrar a fase móvel. Isso porque os solventes orgânicos, como acetonitrila ou metanol, são filtradas em membranas 0,2 μm de porosidade durante o processo de fabricação. Da mesma forma, se você comprar água para HPLC ou gerá-la em laboratório com um sistema de purificação, a última etapa de filtração é através de um filtro de 0,2 μm. No entanto, se houver algum aditivo que outrora fora sólido, tais como tampão fosfato, a filtragem da fase móvel é um passo sensato a se tomar. Apesar do sal para tampão poder ser de alta pureza, ele pode não ter se dissolvido completamente, deixando partículas na fase móvel. Qualquer material particulado na fase móvel também pode causar bloqueio das check valves, causando travamento total ou parcial da mesma. Filtragem da fase móvel através de membrana de 0,45 μm é uma forma eficaz para remover quaisquer partículas da fase móvel. Filtros o,2 um podem ser utilizados, mas eles não são muito mais eficazes que 0,45 μm exigidos para esta aplicação e eles filtram muito mais lentamente. Alguns laboratórios escrevem seu POP de Preparação de fase móvel para HPLC determinando que apenas fases móveis preparadas com solventes HPLC (isso inclui água grau HPLC) não precisam ser filtradas, enquanto todas as outras composições de fase móvel exigem filtração antes do uso. Também é importante usar um filtro de linha no reservatório de fase móvel. Este filtro tipicamente têm porosidade de 10 μm, por isso não é um substituto da filtração de fase móvel, mas serve para manter a poeira fora do sistema e também segura a tubulação no fundo do reservatório, trazendo maior confiabilidade operacional.<br />A amostra é uma segunda fonte de partículas no sistema HPLC. Alguns laboratórios filtram todas as suas amostras em membranas de 0,5 μm antes de colocá-las carrosel do amostrador automático. Esta é uma forma eficaz de eliminar partículas relativas à amostra, mas existe algumas preocupações sobre este processo que podem pesar na decisão do uso deste procedimento. Primeiro, é muito caro - US$ 1 ou mais por filtro - o que pode aumentar significativamente o custo da análise. Além disso, em um método validado, é necessário validar o processo de filtração e usar filtros para cada amostra, e não apenas para as amostras que você acha que precisam de filtração. Você nunca vai conseguir 100% da amostra através do filtro - sempre há poucos microlitros que ficam para atrás. Existe alguma perda do analito por adsorção no filtro ou contaminação por resíduos do próprio filtro? Se houver perda, é a mesma concentração em todas as amostras? Se é para ser usado filtração, todas estas questões devem ser abordadas durante o processo de validação, que pode aumentar o trabalho e as despesas do processo de validação. Um processo de substituição da filtração e que apresenta a mesma eficácia para a maioria das amostras, é centrifugar a amostra em uma centrífuga de bancada por alguns minutos para assentar no fundo qualquer partícula, e depois transferir o sobrenadante para o carrosel de amostras do amostrador automático.<br />A última grande fonte de partículas em sistemas HPLC é desgaste do sistema de selos de bomba e de rotores, selos e válvulas de injeção. Selos de bomba geralmente irão durar de seis meses à um ano em laboratórios com o uso normal dos sistemas. É indicado substituir estes em manutenções preventivas semestrais ou anuais. O custo é baixo comparado com o gasto de uma coluna entupida por partículas dos selos de bomba. Algumas bombas têm filtros no caminho para reter partículas resultantes do desgaste da bomba, para garantir que essas partículas não vão parar nos pontos mais estreitos do caminho fluídico. Consulte o manual de operação da bomba para encontrar o intervalo recomendado de limpeza ou substituição desses filtros. Selos de injeção também se desgastam ao longo do tempo e precisam ser substituídos. Já válvulas e rotores de injeção demoram mais tempo para apresentarem problemas. Um injetor que trabalha com rotor normalmente dura entre 10000 e 20000 injeções, o que é um número satisfatório mesmo pros laboratórios com rotinas intensas de análise. Evidentemente, o desgaste de selos de bomba e partes do injetor vai aumentar com a presença de mais abrasivo na fase móve. Assim, se você executa rotineiramente gradientes de troca iônica ou uso contínuo de tampões,é esperado que os selos se desgastem mais rapidamente do que se você usar condições de fase reversa (fase móvel de ACN:H2O por exemplo).<br />Não importa qual fonte de partículas eu estou tentando eliminar, eu sempre uso um filtro de linha de 0,5 μm entre o injetor automático e a coluna, mesmo que uma coluna de guarda esteja sendo utilizada. Este filtro de linha irá entupir no lugar do frit de 2 μm da cabeça da coluna, e pode ser substituído em poucos minutos, com baixo custo. Basta verificar a pressão do sistema cromatográfico no início de cada sequência de amostras. Quando a pressão do sistema aumenta 25% ou cerca de 500 psi, substitua o filtro de linha e volte ao serviço em poucos minutos.Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com8tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-91182197654082690042008-11-09T14:34:00.000-08:002008-11-17T04:11:21.668-08:00Os 10 maiores mitos sobre colunas de HPLC - Parte 1Mito 1:<br /><br /><br /><br />"Você não pode inverter uma coluna HPLC"<br /><br /><br /><br />Falso. Na prática, uma coluna de HPLC é empacotada com pressões muito mais elevadas que sua pressão máxima de trabalho. Assim, se o solvente adequado foi utilizado para estabilizar o leito empacatado, uma coluna bem empacotada deve ser capaz de trabalhar em ambos os sentidos. Algumas das razões do por que iríamos querer inverter o sentido do fluxo de uma coluna cromatográfica são as operações de lavagem de coluna com fluxo invertido, retirando amostras fortemente adsorvidas na sua entrada (um percurso mais curto do que empurrar os materiais insolúveis e tentar passá-los por todo o comprimento da coluna), e retirar partículas presas para diminuir a pressão de trabalho.<br /><br />Há uma exceção para inverter o fluxo de uma coluna HPLC. Se o fabricante da coluna utilizou um frit de porosidade maior na entrada da coluna, a inversão da coluna poderá arrastar partículas do leito empacotado para fora da coluna. Quando a coluna é empacotada em uma fábrica, a porosidade dos frits nas saídas da coluna devem ser menor do que o menor tamanho de partícula da coluna. Por exemplo, se a coluna empacotada tem um diâmetro médio de 5 μm e uma distribuição de tamanho de partículas de 3-7 μm, o frit utilizado nas saídas da coluna devem ser inferior a 3 μm para evitar que partículas irão escapar do leito empacotado durante o uso da coluna. Para esse exemplo, a maioria dos fabricantes utilizam um frit de 2 μm.<br /><br />Por que um fabricante tem diferentes porosidades de frits na entrada e saída da coluna ? Simples. Um frit de maior porosidade tem menor tendência de entupir do que um frit de menor porosidade. Um frit de 0,5 μm vai entupir mais rápido do que um frit de 2 μm. Então, para impedir o rápido aumento de pressão e de reclamações de clientes, o fabricante utiliza um frit de maior porosidade na entrada da coluna. Normalmente, a coluna é marcada com uma seta que indica que ela deve ser utilizada em uma só direção. Antes de inverter uma coluna HPLC, o melhor é consultar as instruções de utilização da coluna ou verifique com o fabricante coluna para ver se a coluna pode ser invertida.<br /><br /><br /><br />Mito 2:<br /><br /><br /><br />"Todas as colunas C18 (L1) são iguais"<br /><br /><br /><br />Falso. No início da técnica de HPLC, octadecilsilano (mais frequentemente referida como um ODS ou C18) foi uma das primeiras fases estacionárias ligada que se tornaram disponíveis para a nova técnica chamada "cromatografia de fase reversa". Ele se tornou a fase estacionária padrão para a cromatografia de fase reversa, e foi rapidamente adotada pela maioria dos praticantes. Como a indústria farmacêutica foi um dos primeiros setores ao utilizar HPLC e os órgãos reguladores não queriam indicar um determinado fabricante de coluna, o FDA e a USP desenvolveram um sistema de classificação que deu um designação genérica para cada novo método que foi apresentado no âmbito de uma nova aplicação de uma droga. Para as colunas HPLC, uma denominação "L" foi dada e a fase estacionária C18 foi utilizada na maioria dos métodos testados, tornando-se "L1". Como fases diferentes foram adicionados, elas receberam seu próprio "L" seguido de um número (por exemplo, L7 - C8, L10 - CN, L11 - Fenil e assim por diante).<br /><br />Infelizmente, este sistema de designação revelou-se pouco confiável, pois cada marca de coluna C18 foi sintetizada diferentemente, usando sílica gel como material base e resultando em colunas de fase reversa com propriedades diferentes. Para exemplo, alguns fabricantes utilizam octadecilmonoclorosilano e uma sílica gel de baixa superfície, enquanto outros utilizaram o mesmo silano, mas ele ligado a uma silica gel de maior superfície. Estas duas colunas C18 teriam comportamento diferente, com esta última tendo mais C18 do que a primeira. Uma baixa cobertura da fase ligada, deixa silanóis que não reagiram e causam mecanismos de retenção variados. Alguns fabricantes utilizam di e triclorosilanos na polimerização para formar uma camada mais espessa, com diferentes propriedades de difusão. Para reduzir a quantidade de silanóis que não reagiram e estabilizar a fase ligada, alguns fabricantes cobrem estes silanóis com um pequeno silanol (por exemplo, trimetilmonoclorosilano). Silanóis às vezes são responsáveis pela cauda nos compostos básicos em faixas de pH intermediários. Alguns fabricantes vão ainda mais longe e aplicam uma segunda camada de um pequeno silanol para proporcionar uma superfície ainda mais inerte. Alguns fabricantes estão utilizando polímeros como material de suporte (substituindo a silica) e em seguida ligando moléculas de C18 à sua superfície, resultando em uma C18 com empacotamento totalmente diferente, mas ainda assim sendo considerada uma "L1". Outros usam organoalcoxisilanos que possuem um grau diferente de reatividade e podem produzir uma C18 de fase ligada ligeiramente diferente do que seria com um reagente organoclorosilado.<br />Portanto, a declaração de que "uma C18 não é igual a outra C18" é válido ainda hoje. Todas as fases C18 não são iguais e o usuário deve ter certeza que uma vez que um método é desenvolvido, ele indique o P/N da coluna para se garantir um método consistente e robusto. Nos últimos tempos, especialistas têm estudado um grande número de fases C18, numa tentativa de determinar que tenham as mesmas características de tempo de retenção e seletividade. Pela caracterização das fases baseadas em pelo menos cinco parâmetros de retenção, eles têm classificado fases com um valor numérico para que um possa ser capaz de escolher a fase mais similar em características de performance no caso da fase C18 de um determinado fabricante não estar disponível para uso. Esse levantamento também pode encontrar uma fase C18 totalmente diferentes das atuais, podendo abrir o leque de opções de fase C18 para o desenvolvimento de novos métodos.<br /><br />fonte: http://www.lcgceurope.comRonaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com31tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-32670051524865884942008-10-26T12:59:00.000-07:002008-11-01T21:00:38.053-07:00Cromatografia de Troca Iônica - Parte 1Atendendo às solicitações de um dos participantes do blog, vamos falar um pouco sobre cromatografia de troca iônica. Não tenho qualquer experiência nessa técnica, pois atualmente ela é pouco usada em HPLC. Consultei alguns materiais para elaboração deste post, e quaisquer outras informações adicionais serão bem-vindas.<br /><br /><br /><br />A cromatografia de troca iônica, foi desenvolvida em meados dos anos 1970, quando foi mostrado que misturas de cátions e ânions podem ser facilmente resolvidas em colunas de HPLC com resinas trocadoras de cátions e ânions como fases estacionárias. É usada para a separação de compostos iônicos ou ionizáveis. O princípio de separação é uma troca de íons do analito com os íons fixados no trocador de íons. A técnica tem sido utilizada há muito tempo, e algumas técnicas analíticas específicas baseadas na troca iônica podem ser vistas como antecessoras da cromatografia líquida de alta eficiência. Um exemplo específico é a análise de aminoácidos, que combina a separação por troca iônica de alta eficiência com a derivatização com ninidrina, sendo uma técnica altamente sensível e seletiva.<br /><br />Atualmente, a troca iônica raramente é utilizada em HPLC, que é dominado pela cromatografia de fase reversa. Contudo, a técnica de troca iônica se mostra inigualável na separação de biomoléculas, especificamente proteínas e ácidos nucleicos. Também é ainda muito utilizada na análise de íons inorgânicos. A técnica específica utilizada para a análise de íons inorgânicos é chamada de cromatografia iônica.<br /><br />Mecanismo de retenção<br /><br />Trocadores Iônicos são preparados anexando cátions ou ânions à uma matriz de suporte. Para satisfazer a necessidade pela eletroneutralidade, os íons fixados são associados com íons de cargas opostas. Estes íons são móveis e podem ser trocados por outros íons de mesma carga, incluindo os íons do analito. Íons diferentes possuem afinidades diferentes daqueles dos íons fixos, que pode ser expressa como uma constante de equilíbrio de troca iônica. As diferentes afinidades são a base da separação por troca iônica. Quando analitos com diferentes afinidades daquela das resinas dos trocadores iônicos são injetadas dentro de uma coluna de troca iônica, aquelas com maior afinidade com as cargas fixadas migrarão através da coluna mais lentamente. A retenção é reduzida aumentando a concentração dos íons competidores na fase móvel. A retenção e a seletividade da separação podem ser influenciadas pelo tipo de íon competidor e sua carga, e/ou pela mudança de carga dos íons do analito, or exemplo, por uma alteração do pH ou uma complexação.<br />A troca iônica pode ser aplicada para a separação de íons orgânicos e inorgânicos, e também de biomoléculas como aminoácidos, peptídeos, proteínas, ou ácidos nucleicos.<br /><br />fonte: livro HPLC Columns - Theory, Technology, and Practice Autor: Ewe D. NeueRonaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com10tag:blogger.com,1999:blog-4956854112963709885.post-68352757940194189292008-10-18T17:23:00.000-07:002008-10-20T05:15:29.626-07:00Somente 3 coisas - Parte 1Me recordo de ler um estudo sobre a aprendizagem em cursos de curta duração. Como dar aulas de cromatografia líquida (LC) é uma parte importante do meu trabalho, minha atenção foi capturada. Os autores alegaram que, em um curso com duração entre 6 e 8 horas, apenas três pontos deveram ser lembrados. Um dos meus cursos para solução de problemas em HPLC tem aproximadamente 200 slides - o que é que isto diz sobre o quão eficaz é a transmissão de conhecimento crítico em cursos de curta duração ?? Como diz o ditado, eu tenho tentado fazer limonada sem limões, e usar o conceito de "somente três coisas" para ajudar a reforçar o que eu acho que são os pontos-chave. Portanto, usaremos este conceito para criar um programa central de manutenção preventiva para seu sistema HPLC.<br /><br /><br />Degaseificação<br /><br /><br />Desgaseificação da fase móvel é o único meio mais eficaz para evitar problemas com um sistema HPLC. Cromatógrafos líquidos e ar não foram feitos para ficar juntos! As bombas de HPLC são muito eficazes no bombeamento de líquidos, mas se uma bolha de ar entrar no sistema de bombas, na melhor das circunstâncias, você observará uma redução na taxa de fluxo e uma queda na pressão do sistema. Se a bolha é grande o suficiente, a bomba não irá empurrar o solvente, e se a pressão cai abaixo de um limite predefinido, a bomba vai parar. Em alguns modelos de bomba as bolhas passarão, enquanto que outros modelos vão deixar de funcionar quando uma bolha estiver presente. Depois que a bolha passar pela bomba, ela geralmente vai ficar na solução, enquanto ela passa através da coluna. Mas ao chegar ao detector, a pressão do sistema volta à pressão atmosférica e a bolha pode reaparecer dentro da célula de fluxo do detector, causando picos no cromatograma. Este problema pode ser minimizado pela utilização de um restritor de pressão na saída do detector que forneça pressão suficiente para manter a bolha na solução, até que saia do detector. Evidentemente, devemos ter cuidado para não ultrapassar os limites da pressão da célula de fluxo, ou poderá ocorrer danos ao detector. Embora esses picos de ruídos são os sintomas mais comum de bolhas passando pela célula de fluxo, como para o detector UV por exemplo, alguns detectores podem ser mais sensíveis à presença de ar. Por exemplo, oxigênio dissolvido foi relatado por atenuar a fluorescência de certos compostos quando é utilizado o detector de fluorescência. No modo redutor, o detetor eletroquímico é extremamente sensível ao oxigênio dissolvido. Cuidados devem ser tomados para eliminar oxigênio a partir da fase móvel e evitar tubulações oxigênio-permeável (como PTFE) no caminho dofluxo. Todos estes problemas relacionados com o ar dissolvido na fase móvel podem ser evitados se os cuidados adequados são tomados na degaseificação da fase móvel antes do uso. Durante muitos anos, o padrão ideal para a degaseificação foi a purga com Hélio. Este, simplesmente borbulha Hélio através de um difusor colocado no reservatório de fase móvel. A purga com Hélio é a forma mais eficaz para remover o ar dissolvido da fase móvel, com uma remoção de aproximadamente 80% do oxigênio . Com uma purga bem distribuída, um volume de hélio irá remover quase todo o gás que pode ser retirado de um igual volume de fase móvel. Isto significa que 1 L de hélio borbulhado em 1 L da fase móvel fará o trabalho. O Hélio é a única forma eficaz de remover o oxigênio da fase móvel para evitar problemas específicos de oxigênio dissolvido, tais como a atenuação da fluorescência ou problemas no detector eletroquímico mencionados anteriormente. No entanto, se o objetivo principal é remover o ar dissolvido para que não ocorra a formação de bolhas, a degaseificação por vácuo também é eficaz como uma técnica de degaseificação. A maioria dos sistemas HPLC vendidos hoje vêm com um degaseificador em linha de série ou como opcional. O degaseificador em linha é simples de usar, livre de problemas, e eficaz. Dou-lhe crédito pela enorme redução de queixas ligadas à bolhas que ouvi nos últimos anos.<br /><br />fonte: traduzido e adaptado <a href="http://chromatographyonline.findpharma.com/">http://chromatographyonline.findpharma.com/</a>Ronaldo Buissa Nettohttp://www.blogger.com/profile/13737841934025438760noreply@blogger.com13